流式细胞术检测蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌BXPC-3细胞凋亡率的影响.docVIP

精品论文 参考文献 流式细胞术检测蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌BXPC-3细胞凋亡率的影响 （黑龙江中医药大学 黑龙江 哈尔滨 150040） 【摘 要】目的：研究PAMD对荷瘤小鼠BXPC-3细胞凋亡率的影响。方法：裸鼠右腋皮下接种胰腺癌（BXPC-3）细胞建立模型，应用流式细胞仪检测：离子激发光波长 488nm，功率300mw，P染色阳性细胞的数量由计算机软件自动处理，绘制DNA含量分布图，以图上G1峰前形成的亚二倍体峰（Ap峰）所占的百分比表示凋亡率。观察PAMD对荷瘤小鼠BXPC-3细胞凋亡率的影响。结果：实验通过对G1峰前的亚二倍体峰所占百分比的分析，观察PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠细胞凋亡率的影响，细胞凋亡率均明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05； P＜0.01）。 【关键词】流式细胞术；胰腺癌；BXPC-3细胞 【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6194（2015）02-0226-01 1 实验材料 1.1实验动物 裸鼠50只，体重20plusmn;2g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，合格证：SCXK（京）2007-0001。 1.2实验瘤株 胰腺癌瘤株（BXPC-3）购自中国科学院上海生命科学院细胞资源中心。 1.3动物饲养 在黑龙江中医药大学药物安全性评价中心饲养。 1.4药物 （1）蝙蝠葛酚性碱（PAMD）由黑龙江中医药大学药学院王栋教授提供，用时先以1molmiddot;L-1 HCl溶解后，再用1molmiddot;L-1 NaOH调pH值至中性，加蒸馏水至所需浓度。实验时临时配制成溶液。 （2）注射用环磷酰胺（Cyclophosphamide For Injection），江苏恒瑞医药股份有限公司，批准文号：国药准字 1.5 实验仪器 CLOUTEREPICS-XL型流式细胞仪 美国Beckman-Coulter 公司 LDZ522型低速离心机 北京医用离心机厂 1.6 试剂碘 化丙啶（propidiumiodide，PI） Sigma公司 2 实验方法[1] [2] [3] 2.1流式细胞仪检测荷瘤小鼠细胞凋亡率 按以下实验步骤操作： 2.1.1 接种24h后，各用药组均腹腔注射给药，连续21d。停药后次日称取小鼠体重，摘眼球取血处死小鼠，并用酒精消毒操作部位皮肤，置于超净工作台中（事先以紫外线灯消毒30min）以无菌操作剥取肿瘤结节，???除纤维包膜和坏死组织。迅速用眼科剪在冰盘上尽可能剪碎。 2.1.2 将组织置于300目铜网上，用PBS液冲洗，网搓法制成单细胞悬液。 2.1.3 用PBS液稀释为10mL，反复吹打30次，沉淀10min，3000rpm离心10min，弃上清液。 2.1.4 沉淀加预冷的75%乙醇5mL混匀，4℃放置12h，3000rpm离心10min，弃上清液。 2.1.5 加PBS液5mL，3000 rpm离心10min，弃上清液。 2.1.6取沉淀调细胞浓度为2times;106middot;mL-1，取 1mL 细胞悬液加入RNase 1.6mL (1mgmiddot;mL-1) 37℃水浴箱中孵育 30min，再次离心10 min 后将沉淀溶于 0.4mL PBS 中。 2.1.7 4℃通光条件下加PI染液(内含有200 mgmiddot;mL-1 PI，1% Triton，0.9%NaCl，50 mgmiddot;mL-1 RNase)200mu;L染色30min。 2.1.8 应用流式细胞仪检测：离子激发光波长 488nm，功率300mw，P染色阳性细胞的数量由计算机软件自动处理，绘制DNA含量分布图，以图上G1峰前形成的亚二倍体峰（Ap峰）所占的百分比表示凋亡率。 3 实验结果 PAMD对荷瘤小鼠细胞凋亡率的影响，实验结果见表1、 实验通过对G1峰前的亚二倍体峰所占百分比的分析，观察PAMD对BXPC-3荷瘤小鼠细胞凋亡率的影响，表1结果显示， PAMD高、中剂量组及阳性对照组与模型对照组比较，细胞凋亡率均明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05； P＜0.01）。 4 讨论 由于形态学观察到的细胞凋亡只能定性，不能定量，因此，本实验采用流式细胞仪（Flo