RAPD技术在果树种质资源研究中的应用研究.pdfVIP

园艺学文集 RAPD技术在果树种质资源研究中的应用 蒋开军l 李润唐1 张秋明2 张映南2 (1．湖南农业大学园艺园林学院长沙410128 2．湖南省园艺研究所长沙410125) 【摘要】RAPD技术是一种简单、快速、比较经济有效的标记方法。近年来在果树上．尤其在种质资 源的研究中被广泛使用。本文就RAPD在果树种质资源研究中的一些应用做了简要的概述。 【关键词】RAPD果树种质资源 果树的树体高大，遗传背景复杂．育种周期长。许多重要经济性状是受多基因控制的数量 性状，种质资源研究采用传统方法，进展缓慢。随着生物技术的不断发展和成熟，在果树中也 开始被频繁应用。建立在DNA水平上的分子标记的出现，为遗传图谱的构建、系统发育关系 分析、种质资源分类鉴定、体细胞杂种的鉴定、基因定位等开辟了一条新的途径。 RAPD(Random／MnplifiedPolymorphic Welsh领导的两个研究小组于1990年发明的一种新型DNA分子标记技术“‘21，其原理是利用 一系列人工合成、碱基随机排列的寡核苷酸单链为引物(常用tobp核昔酸)，通过PCR技术对 所研究的基因组片段进行扩增，便得到一条扩增产物。一般植物基因组每个引物可以得到2 ～f0个DNA片段，每个扩增产物代表了基因组上的一个位点。‘扩增产物经琼脂糖电泳分离， 然后EB染色检测；也可对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后用银染法显示；另外，为提 高检测灵敏度，也可对扩增产物进行同位素标记，再用PAGE分离，用放射自显影检测。扩增 产物的多态性基本上反映了基因组DNA的多态性。 1 RAPD技术在果树种质资源研究中的应用 1．1品种鉴定与分类 果树品种的分类与鉴定，以往主要采用形态学，并结合细胞学、孢粉学和生理生化特征(如 同工酶)等方法。然而，形态性状和同工酶的遗传标记数量有限，需要较长的生长周期以及较 多的杂交组合群体，因此工作量很大。另外，植物形态及表型是遗传与环境相互作用的结果， 表型并不能完全或真实地反映遗传变异。大量事实证明，植物的存在形态和生理表型特征具 有可塑性。这种方法带有局限性，很难对果树品种进行准确的鉴定与分类。RAPD分析可在 DNA水平上提供大量的遗传信息，应用这些信息进行果树品种的研究，可使果树种质资源中 的一些难题迎刃而解。据统计，有关果树RAPD分析的报告，几乎一半属于品种鉴定方面，涉 及到核桃㈨枣‘“、梅‘“、李o“、桃‘“、杏‘“、樱桃：“、龙眼o“、荔枝‘…、苹果‘…、枇杷㈦、柑橘…】、蟠 桃”“、柚类”“”1等。李汝刚”1用17个引物扩增6个苹果品种的基因组DNA，共产生150多条 DNA片段，其中9个引物产生了18条多态性DNA片段，将6个品种分成2组。结果表明， RAPI)能区分开芽变株与实生苗植株，但检测不到芽变株之间的遗传变异。Graham等(1994) 用lO个随机引物对10个红树莓品种进行RAPD分析，其中9个引物产生了多态性谱带，并可 蒋开军等RAPD技术在果树种质资源研究中的应用89 一——————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一 将这10个品种区分开来。RAP嘴示的品种间的亲缘关系与系谱记载情况相符¨0 J。张俊卫 等“…用RAPD技术对梅的野生种及其近缘种李、桃、杏、樱桃等17个品种的系统发育进行了 研究，12个随机引物共扩增出13l条带，其中65条为多态性带。通过对这些扩增带的分析， 认为梅的基因中渗入了较多的杏、李基因。聚类分析结果表明，李、杏在梅的系统发育过程中 处于基本等同的地位，桃、樱桃与梅的亲缘关系则较远。林同香等”1用RAPD对32个龙眼品 种进行分析，把它们分成6大类：水涨乌龙岭类、赤壳处暑本类、东壁类、荔枝本类、南湖焦核 类、立冬本类。结果表明，RAPD技术能应用于检测品种问的混杂。程中平等”81采用RAPD 技术，利用200个引物筛选的22个10碱基随机引物对桃182个变种、类型、品种进行DNA扩 增，对扩增位点上的带型分析，观察到有的引物在某一位点上明显有带的分离，且$65、$459、 S167、$60引物在这一位点可以包含一个类群或几个类群全部的供试品种、变种或类型，但各 类群都没有各自独特的特征带