Zhog IFNγ对大鼠胚胎BFSN胆碱能神经元的促分化途径研究.pdfVIP

罗艳红1赵翔2安棒2 1．广西右江民族医学院生物化学及分子生物学教研室，广西百色，533000； Z．北京大学嚣学部细胞生物学系，北京，100083 摘 要 奉研究刺用免疫姐化PAPj墼时甩条件培养鲞进行培养的E16wist盯大鼠基底 接作用于脬碱能神妊元分化，而是运过激活胶质细臆产生的中两物质未起作用．推测是小殷 质细胞产生IFNPLI． 关键词lFN了样分予胶质细胞条件培养鲞星形细胞条件培养鲞胆碱能神烃元分 化太鼠 是通道激活胶质维稳产生的中闯物质来起作用．因此哪一种胶质细胞产生IFN7一Ll，以及分离、纯化、 鉴定出该因子缀傻攒进一步研究． 且蘸已有大基的研究证明免疫细胞因子不仅通过免疫细耱产生后作用于神经系统，而且可以在脑 内合成、分泌并发挥其生物学效应．如由胶质细胞产生，获质细胞憝许多细胞因子蠹l》重要来源，在感染、 TGF一日，FGF等．n5^”mⅢ3小胶质细胞能合成IL—l、IL一6、TNF—n等．c”】 ~|CSF 耜M—CSF在胶质细魏产生过纛中产生。而MCSF促进小胶质细胞增殖． 表达，CAMI[”．1叼及CAM一1 -嘲索自然辩学基金(N资助项目 ·129· 雠基形纲跑增殖．n“叼用1000U／mL 殖．它的作用蹙通过减少星形细胞合成，产生NGF．[13该作用被Ab．糟N7封闭．[蜘 诱导小胶质细胞产生细胞毒索．综上所述。免疫细胞因子在神经系统发育过程中的作用可归纳出如下t ①神经系统中存在大量的免疫细胞因予，任何一种生物学行为都是细胞因予互相作用的结果．⑦星彤 细胞和小胶质细胞合成、分泌的细胞因予在影响神经元作用中起关键作用．现已知免疫细胞因子调带 棒经营养分子的产生，神经营养因子可使胶质细胞产生大量的细胞因子作用f神经元． 一、实验材料和方法 (一)主要试荆和动物 Gibco公司产晶tCMEM、F一12培莽基、N。培葬基、rat Ab-IFNr 产品．Sigm8公司产品lPo聊ys主ne、es商扯、BSA．rat鑫nti—mouse lgG、PAP。lE京医辩大学实验动物部tEl6 只)． (二)胆碱能型神经元的鉴定 chAT免疫纲腿化学染色方法显示胆碱能撮神经元． ClIAT免疫细胞化学染色参照PAP法，方法妇文献[30]． (三)胶质细胞的条件培养基对胆碱能神经元分化的影响 1．混合胶顼细胞培养 薪生O一1天wist大鼠皮质混合股质细胞培养： 0．25mM EDTA、O．05％胰酶消化1min。用lo％FCS 胞悬液．在镶Polylysin的24乳扳中或25 天换液，以后每三天换滚，培养到籀10灭，分离细魏． 2．星形胶质细胞逡养汹1 青一链双抗)培养，用不镰PoIybsi聃新塑料培养扳培养，每3天按藏。培养10天． 星形胶质细胞鉴定：用免疫细胞亿学技_术鉴定量型胶质细胞，方法如下： 24孔板上。浓度为5×10‘cells／mL、lO％FCSDMEM培养．2天后鉴定GFAP． 3 GFAP染色；①PBSmin×2}②冷酸酒(5％球醮酸潜于无水乙醇)一20℃20min进行固定I 3 I ③T—PBSmin×3l④T—P璐+lo％羊血清20“n}⑤一抗{抗GFAP(1 I l 1504℃2 mL)48h，4℃I⑥T—PBS洗3×3戚nl⑦抗羊IgGhf@T—PBS洗3×3 ·130· l l l l 1502h 50显色lo