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实验模式动物—斑马鱼 生药学 张彩 Use Zebrafish AS A Model Organism 汇报内容 斑马鱼概况 斑马鱼作为模式生物的优点 斑马鱼在药物的评价中的应用 采用模式生物斑马鱼评价三种中药成分的急性毒性 概 况 70年代早期，斑马鱼仅在一个研究中心被详细研究：在位于Eugene 的 俄勒冈大学， Charles Kimmel 及其同事开始将斑马鱼作为研究发育的动物模型，并探索其作用。 第一部分 Chuck Kimmel 斑马鱼作为模式动物逐渐受到关注Turn Eyes to Fish Christiane Nüsslein-Volhard 1995 诺贝尔奖获得者 was able to identify and classify a small number of genes that are of key importance in determining the body plan and the formation of body segments, turned eyes to fish and find a wide range of mutations Wolfgang Driever 斑马鱼基本特性 产于热带印度，孟加拉国。 成鱼体长4～6厘米。体呈纺锤形。雌雄易区分。 性情温和，对水温水质要求不高，易饲养。 属卵生鱼类 ，4月龄进入性成熟期。繁殖期约7天左右。产卵量高，繁殖力很强 。 体外受精，胚胎透明，在24小时内就可发育成形， 2~3天孵出仔鱼 。 ♀ ♂ 斑马鱼的繁殖 心血管系统发育Development of Zebrafish Vascular System Nature Medicine, 1995 Development of Zebrafish Vascular System 28 hours 1.5 days 2 days 2.5 days 3 days 3.5 days 4.5 days 5 days 6 days 7 days 斑马鱼的骨骼发育 缺少chordin表达的斑马鱼的BMP蛋白水平异常，鳍和尾部骨架也异常—注射chordin mRNA后可恢复。因此研究者使用斑马鱼的这项特性来进行基因筛查，以确定脊椎动物骨骼形成的调节机制。 —Rik Derynck Nature Genetics ,1999 斑马鱼的心脏再生 Heart Regeneration in Zebrafish 斑马鱼的Mps1 mitotic checkpoint kinase是 一个至关重要的细胞周期调节因子，如发生突变，则斑马鱼的心脏不能被修复而形成疤痕。因此，损伤诱导的斑马鱼心肌细胞增殖可以克服疤痕形成，使心肌再生。这个发现表明斑马鱼在分析心脏再生的分子机制方面起重要作用。 13 DECEMBER 2002 VOL 298 SCIENCE 心脏切除后心室肌的再生 Regeneration of ventricular myocardium in the resected zebrafish heart 斑马鱼在药物评价中的应用 1.一般毒性评价 2.发育毒性评价 3.心血管毒性评价 4.肝脏毒性评价 5.神经毒性评价 6.肾毒性评价 7.肠胃毒性评价 8.视觉毒性评价 9.耳毒性评价 10.软骨毒性评价 斑马鱼在药物评价中的应用 1.一般毒性评价：在化合物的一般毒性评价可在胚胎、幼鱼、成鱼的各个阶段进行,相应的观察指标略有不同。在胚胎期,在化合物的作用下可观察终点有卵凝结、体节形成、尾部延展、心跳、色素沉着、孵化率、畸形率等。幼鱼和成鱼主要是统计LC50、死亡率等。 2.发育毒性评价：在胚胎发育和幼鱼发育过程中,很多器官系统的形成过程对药物的介人是相当敏感的,比如脑、心血管、肝脏、软骨、脊索、胰腺、肠道、肾脏,极易导致畸形的产生,是评价药物致畸性的有效模型之一。 斑马鱼在药物评价中的应用 3.心血管毒性评价：心脏是斑马鱼第一个发育起来并发挥作用的器官,也是很多化合物的首要作用靶点。由于胚胎和幼鱼的透明性,无需借助遥测或其他技术就可以实时观察心跳、心脏的收缩性、血液循环,非常的便利。 4.肝脏毒性评价：药物引起的肝损伤是制药业一个主要的毒理学问题。目前,应用斑马鱼进行的肝脏毒性评价终点主要有血清酶、肝细胞凋亡、细胞色素P450和组织病理学变化。 斑马鱼在药物评价中的应用 5.神经毒性评价：斑马鱼胚胎在24hpf原代神经元细胞开始分化,48hpf脑室形成,在6dPf所有的神经系统形成