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- 2018-01-28 发布于浙江
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线虫研究相关技术
线虫研究相关技术1.线虫的培养和分离(1)破开已感染南方根结线虫的芹菜根系,在实验室内通过贝尔曼漏斗法提取虫体。从所得虫体中挑取卵囊,卵囊用0.2%次氯酸钠溶液消毒0.5 min后,经无菌水冲冼。置卵囊于无菌水中孵化,取2d后孵出的线虫(2龄线虫,简称J2)供测定用。(刘晟, 等,2009)(2)根结线虫:挑取人工接种南方根结线虫的番茄根,用组织捣碎机打碎,依次过200、325、500目线虫标准筛,用无菌水冲洗500目筛上的虫卵置于无菌水中孵化,取第2d孵化出的活幼虫(2龄幼虫,简称J2)供测试。(赵卫星,等,2006)。(3)线虫的扩大培养:将采集到的受马铃薯严重危害的马铃薯薯块用自来水冲洗干净,剖开病薯,用刀切成薄片,然后用镊子将病薯撕成小块,待用。在漏斗底部铺上两层餐巾纸,将切好的病薯小块放入漏斗中加入无菌水,下面用带止水夹的橡胶管相连,每隔12h左右打开止水夹用烧杯接取橡胶管中下部的液体备用。将分离到的线虫用无菌水洗出,冲入无菌的指型管中,用0.5%的次氯酸钠消毒2min,然后用无菌水冲洗2~3遍,使线虫自然沉降或用离心机使线虫快速沉淀(6000/rpm,3min)。再在离心管中加入各约S00mg/kg的链霉素(100万单位/g),保持1h,离心后吸出消毒液。再用无菌水冲洗3遍,定容到一定体积后放在4℃冰箱中保存备用。在PDA(约20m1)平板培养基上接入灰葡萄孢菌(Bot
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