浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响分析.docVIP

精品论文 参考文献 浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ浅谈人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响分析 湖南省宜章县中医院 湖南宜章 424200 摘要：目的：对人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响进行分析。方法：对2日龄的Wistar大鼠的乳鼠心肌细胞进行原代培养，且利用AngⅡ进行诱导后建立相应的心机细胞肥大模型，将其随机分为三组，PDS低剂量组，PDS高剂量组、肥大模型组，另外设立一个正常的对照组，通过Leica QWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行测定，采用BCA法对心肌细胞中蛋白质的总含量进行测定，采用荧光分光光度计对细胞中游离钙离子的浓度进行测定。结果：PDS可以使肥大心肌细胞的表面积显著减少，使心肌细胞中总蛋白质的含量、钙离子的浓度降低。结论：PDS对Angll诱导心肌细胞肥大有相应的抑制作用，其有可能与隔绝钙调神经磷酸酶的信号传导通路相关。 关键词：人参二醇组皂苷；血管紧张素1I；心肌细胞肥大 人参二醇组皂苷（PDS）主要是从五加科植物中的人参茎叶提取纯化而得，其包括人参Rbl，Rd，Rb2，Rc等一些皂苷单体。PDS具有抗心机梗死、抗休克、降低血糖、使血脂代谢紊乱得以改善的作用，在本研究中显示，PDS可以使缩血管物质的含量降低，增强抗氧化的能力，说明PSD在大鼠心梗之后还可以对心室重构起到相应的保护作用。本文主要就人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响进行分析，现作报道如下： 1.资料与方法 1.1动物 选用实验动物中心的2日龄Wistar大鼠乳鼠，其主要是用来培养体外的心肌细胞。 1.2乳鼠心肌细胞分组、原代培养、处理 对乳鼠的心肌细胞进行原代培养时，应选取2 日龄Wistar大鼠乳鼠的心脏，采用PBS对其腔室中的血液进行冲洗，并将结缔组织、心房剪掉，并把心室全部剪碎，剪为1mm3左右的组织块，采用0.125%的胰酶在温度为37℃的水中进行多次消化，且每次约保持5min。以10%的小牛血清来终止消化，并对其进行5 min的离心，待细胞沉淀之后利用DMEM进行培养，重悬之后接种在培养瓶中，在CO#8322;孵箱中进行90min的培养，并利用差速贴壁将非心肌细胞全部去除。对细胞的浓度进行调整，将0.1mmol/L5ˊ-溴脱氧尿苷加入其中，并接种到相应的培养板上，在CO#8322;孵箱中进行培养，培养48h之后对培养液进行更换，72 h后将其倒置在显微镜下进行观察。另外，在心机细胞中加入浓度相同的PDS、体积相等的心肌细胞培养液，且加入剂量为10-7mol/L的AngⅡ让其作用48h。分组和处理：肥大模型组：10-7mol/L的AngⅡ，对照组：等体积的培养液，PDS高剂量组：10-7mol/L的AngⅡ和800mu;g/mlPDS，PDS低剂量组：PDS400mu;g/ml、10-7mol/L的AngⅡ。 1.3测定心肌细胞的表面积 将1ml的1times;105个/ml心肌细胞悬液接种在24孔的培养板中，且通过上述的分组处理之后，利用胰酶对心肌细胞进行消化并使其脱壁，且反复进行轻柔、将细胞吹散，然后静置、照相。通过Leica QWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行详细的测定，每一个组中检测五个视野，取平均值来进行对比分析。 1.4测定心肌细胞中的总蛋白含量 将2.5ml的3times;105个/ml心肌细胞悬液接种在6孔的培养板中，通过上述的分组处理之后，将上层的培养液弃除，对PBS进行预冷、冲洗、轻柔，再把Western及IP细胞裂解液依次加到每个孔中，采用移液器对其进行吹打，让裂解液充分接触到细胞，进行裂解之后，进行5min的离心，并将上清收集好，即为细胞中的总蛋白。然后通过标准曲线将各组细胞中的蛋白浓度求出来，并将单个细胞的总蛋白量计算出来。 1.5测定心肌细胞中细胞游离钙离子的浓度 在6孔的培养板中接种2.5ml的3times;105个/ml心肌细胞悬液，同样经过上述的分组处理之后，利用胰酶使心肌细胞得到消化，并让其脱壁，细胞的浓度必须超过106个/ml，且取1ml放到EP管内。在每一个实验组的管内加入Fura-2/AM的储备液5mu;l，待其最终的浓度为5mu;mol/L时，进行摇床、震动（37℃，60 rain），让Fura-2/AM充分和细胞进行反应。进行1200 r/rain的离心5 min，在利用D-Hank平衡盐溶液对细胞进行清洗两次，让细胞悬浮，然后加入玻璃比色杯内，再通过荧光分光光度计对其进行详细的测定。首先对340nm、380nm激发光中产生的荧光强度进行测定，将0.1%的Tnton X-100加入其中，再对