白色链霉菌分批发酵生产ε聚赖氨酸的动力学分析研究.pdf

白色链霉菌分批发酵生产￡一聚赖氨酸的动力学分析 贾士儒’范宝庆戴玉杰谭之磊孙艳芳王国良李琳莫志文 (工业微生物教育部重点实验室，天津科技大学) 摘要：￡一聚赖氨酸是由白色链霉菌发酵产生的一种天然的均聚物，是由25～35个L一赖氨酸残基 通过单体L一赖氨酸的a一羧基和e一氨基形成的酰胺键依次连接而成。本文根据分批发酵过程当中底 物浓度的变化，菌体量的变化，产物浓度的变化。运用si鲫oid模型初步建立了底物消耗，菌体生 长和产物生成的动力学方程，并对发酵过程当中的一些参数进行了动力学分析，为生产e一聚赖氨酸 的分批发酵和补料分批发酵提供了理论依据。 关键词：e一聚赖氨酸；Sigmoid模型；动力学 ￡一聚赖氨酸(e—PL)是一种由25～35个L一赖氨酸残基通过单体L一赖氨酸的a一羧 基和￡一氨基形成的酰胺键依次连接而成的均聚氨基酸，它是1977年日本国Shima和 346中分泌的胞外产物n’。 ￡一聚赖氨酸抑菌谱广，抑菌性强，对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌、酵母菌，和霉 菌等均有抑制作用，热稳定性以及安全性高，因此是一种非常有前景的生物食品防腐剂。 另外，e一聚赖氨酸和它的衍生还有多种不同的应用，如作为乳化剂、食疗剂、可降解 纤维、可高度吸水的凝胶、药物载体、抗癌剂增强因子，生物芯片等等n’。 ￡一聚赖氨酸自从被发现以来，它的生产条件不断地被研究优化，产量也不断地提 升。但大部分集中在对培养基的优化和菌种的筛选层面上，确未见对e一聚赖氨酸发酵 生产的动力学研究来达到对产量提升的目的。因此，本文从底物消耗、菌体生成以及产 物合成层面，利用Sigmoid函数构建了e一聚赖氨酸发酵生产￡一聚赖氨酸非结构动力学 模型，并根据Boltzmann拟合求解出模型参数，并对发酵过程当中的一些参数进行了动 力学分析，为分批和补料分批发酵法生产e一聚赖氨酸提供理论依据。 l材料与方法 1．1菌种 a』6￡，J“s ．罗卿p芒伽弦Ps UV80由天津科技大学生化工程实验室筛选保藏 的支持 1．2培养基及其培养方法心’ 1．2．1培养基 斜面培养基为贝纳特斜面培养基(g几)：葡萄糖10．0，蛋白胨2．0，酵母粉1．0， min。 琼脂15．0，pH7．2，121℃下灭菌20 0．2，K：HP0。8．0，KH：P046．0，pH6．8，12l℃灭菌20min。 1-2．2培养条件及方法 斜面培养：取4℃冰箱中保存的菌种，接神至斜面培养基中，30℃恒温培养5～ 7d左右至长满灰色孢子。 一级摇瓶种子培养：取一环斜面菌体接入装有100mL种子培养基的500lllL三角瓶 中，30℃，220r／min，旋转式摇床培养一定的时间。 二级摇瓶种子培养：以10％(v／v)接种量将一级种子培养液接入装有90mL种子 培养基的500mL三角瓶中，30℃，220r／min，旋转式摇床培养一定的时间。 发酵罐培养：初始pH6．8，初始糖浓度50g几，温度30℃，通风量1～2vvm，控制 D0 r／min)。 30％(搅拌转速为300～1000 1．3分析测定方法 1．3．1菌丝干重测定(DCW)‘2’ min， 滤纸预先于烘箱95℃烘至恒重，取10mL发酵液，在4000r／min条件下离心8 沉淀用无菌水洗涤2—3次，滤纸过滤，将滤纸和菌体在烘箱中95℃干燥至恒重，计算菌 体干重。 1．3．2残糖测定他’ 4000 取10mL发酵液， r／min离心8min，取上清液，使用SBA一40C生物传感分析 仪测定发酵液中的葡萄糖浓度。 1．3．3e一聚赖氨酸的含量。’ 测定方法参照Itzhaki的方法即甲基橙比色法，请参考文献(3)。 2．结果与讨论 2．1白色链霉菌分批发酵生产e一聚赖氨酸 图1表明，菌体 图l，2，3为5L发酵罐分批发酵生产e一聚赖氨酸过程曲线他’。 在8、32h耗糖速度迅速加快，之后耗糖速度缓慢下降，发酵结