穿心莲内酯对变应原诱导的小鼠气道炎症影响及作用机制研究.pdfVIP

目 录 1 穿心莲内酯对变应原诱导的小鼠气道炎症影响及作用机制 1．1 中文摘要……………………………………………………………1 1．2 英文摘要……………………………………………………………4 1．3 前言…………………………………………………………………9 1．4 材料与方法…………………………………………………………12 1．5 结果…………………………………………………………………21 1．6 讨{仑…………………………………………………………………24 1．7 结{念…………………………………………………………………29 1．8 附图表………………………………………………………………30 参考文献……………………………………………………………36 1．9 英汉缩略词对照表…………………………………………………39 2 致{射…………………………………………………………………40 3 综述STAT的乙酰化………………………………………………41 (综述) 4 在读期间发表的论文复印件(不含首页、目录) …11[II)lll ll II I[IIIII Y1 鼠气道炎症影响及作用机制 摘要 实拥有很强的抗炎活性及治疗变态反应性的肺部炎症的潜力。在目前的研 究中，我们通过测定穿心莲内酯治疗后的小鼠气道反应性、气道及周围炎 factor-kB， 症细胞程度、免疫荧光与免疫印迹实验中核因子(nuclear NF．KB)在肺组织内的表达，进一步研究是否穿心莲内酯可以抑制变应原 诱导的气道炎症、气道高反应性以及对核因子NF．r．B／P65在气道及肺组织 中表达活性的影响，探讨在此过程中药物作用的机制。方法：选取2月龄 健康BALB／c雄性小鼠24只，随机分为对照组，模型组，药物治疗组，每 组各8只。乙醚麻醉小鼠后，哮喘组和治疗组小鼠分别在第1天和第8天 对照组仅腹腔注射同等剂量PBS。第15天到第22天，哮喘组及治疗组的 小鼠每日用浓度为0．2mg／ml的卵清蛋白溶液滴鼻激发，治疗组小鼠连续7 天腹腔内注射剂量按体重5ug／g计算的穿心莲内酯溶液。经乙酰甲胆碱激 发24小时后，用无创小鼠肺功能仪器记录小鼠气道的高反应性。处死小鼠 后，分离并取下肺组织，取部分肺组织以10％福尔马林固定，石蜡包埋后 切成6um的薄片，HE染色光镜下观察肺组织炎症细胞侵润程度。评分标准 按照文献…根据血管周围、气道周围以及肺间质单核炎症细胞侵润情况不 同(分为0-3分)，评分后做后续统计。取剩余部分做冰冻肺组织切片，加 入NF．KB抗体及生物素二抗孵育，细胞核荧光染色剂定位细胞核后特定波 长激发抗原抗体复合物。激光共聚焦显微镜扫描冰冻切片。最后分别在对 照，哮喘及治疗组中各称量等量肺组织，液氮冷却，快速研磨加入适量RIPA 中。BCA法测定三组蛋白浓度，计算后各加入适量2XSDS，等量上样。蛋白 l 样品加入10％的SDS—PAG 小时。15V恒压30分钟 封闭一小时，加入1：300 漂洗NC膜lOmin×2次。 TBST洗涤10minX2次。 入柯达4000MW成像仪(美国产)，曝光后保存条带。结果：1．一般行为观 察实验造模期间，对照组小鼠毛色光泽，行为敏捷，乙酰甲胆碱诱导哮喘 不敏感，没有明显的喘息表现。哮喘组随着吸入乙酰甲胆碱剂量加大出现 四肢挠抓，躁动不安，伴有呼吸加速，腹部内陷起伏等呼吸困难症状。穿 心莲治疗组亦出现以上症状，但频率较哮喘组少，症状较轻。2．穿心莲内 酯对小鼠气道高反应的影响根据FinePoint软件分析的图表结果，我们 可以得出以下结论。①给予PBS的对照组的小鼠，增强呼气间歇 气道反应性随着乙酰甲胆碱浓度升高而略有上升。②哮喘组模型小鼠有很 明显的气道高反应性，Penh