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东山九孔鲍病毒病病毒的分离观察
21 2 Vol.21, No.2
2002 5 JO URNA L OF OCEANOGRAPHY IN TAIWAN STRAI T May, 2002
1 2 1 1 2 3
方 莹, 黄印尧 , 颜江华, 颜 青, 吴文忠, 倪子绵
(1., 361005;2.,
361012;3., 361005)
:运用电镜负染和超薄切片技术, 在福建东山患病的九孔鲍的肾组织细胞、肝细
胞和肠 皮细胞中可见有大小为100nm 的具包囊的六角形病毒颗粒, 病鲍组织匀浆
后, 经蔗糖分步超速离心, RNA 酶及DNA 酶消化去除组织内DNA、RNA 后, 获得纯
化的病毒颗粒.又经蛋白酶K 消化后得到病毒的核酸, 以DNase I 或RNaseA 分别消
化, 经1%(m/m )的琼脂糖凝胶电泳证实该病毒为DNA 病毒.
:九孔鲍;病毒;分离
:S944.3 :A :1000-8160(2002)02-0199-04
1999 , (Ha liotis d iversicolor ),
、、.、、,
, 100%.,
[1]
, , .
.
1
1.1
1999 2～4 .
1.2
3
:0.01mol/cm PBS , 2.5%(V/ V )-
3
;1mm , 2h , p 7.2 ～7.40.5%～
1.0%(m /m ) 3h;-, 4h, 618
, 35、45、60 ℃36h;LKB8800,
, JEM-100CX2 、.
:, , 2%(m/m )(p =7.0)
5min, JEM-100CX2 .
1.3
3
500g, 5 TN (p =8.0, 0.1mol/dm Tris- Cl
3
0.15mol/dm NaCl), 、, ;5min(800r/min),
:2001-10-24
:(1968～ ), , .
·200 · 21
, Triton-100 1%(m/m ), 4℃2h.30min(10kr/min),
, 7%(m/m )PEG (, PEG 20 000)3%(m/m )NaCl
, 4 ℃.30min(10kr/min), , PBS 、.
[ 2]
40%(m/m ) , 4℃1.5h (40kr/min),
3 3 3
, 0.1mol/dm Tris- Cl-0.1mol/dm NaCl-0.05mol/dm MgCl (p =7.5)
2
.DNase I(Worthington Biochemial) RNase(AMRESCO), 50℃ 1h ,
40%(m/m )1.5h(40kr/min), Tris-EDTA(TE, p =8.
0).
1.4
3
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