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毕赤酵母Gpn12异戊烯基转移酶NovQ催化合成MK-3.PDF
140 生 物 工 程 学 报 吴锡华 等/毕赤酵母Gpn12 异戊烯基转移酶NovQ 催化合成MK-3
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn Jan. 25, 2018, 34(1): 140−148
DOI: 10.13345/j.cjb.170158 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved
·生物育种与工艺优化·
Gpn12 NovQ MK-3
1,2 1 1 1 1 1,2 1,2 1,2 1,2
吴锡华 ，李哲敏 ，刘会 ，王鹏 ，王丽 ，方雪 ，孙小雯 ，倪文枫 ，杨强 ，
1 1
郑之明 ，赵根海
1 230031
2 230027
, , , . Gpn12 NovQ MK-3. , 2018, 34(1): 140–148.
Wu XH, Liu H, Wang P, et al. Synthesis of vitamin K2 by isopentenyl transferase NovA in Pichia pastoris Gpn12. Chin J
Biotech, 2018, 34(1): 140–148.
摘 要: 对异戊烯基转移酶NovQ 在毕赤酵母Gpn12 异源表达过程中诱导剂甲醇添加量进行了探究，并以毕赤酵
母Gpn12 全细胞为酶源，以甲萘醌、异戊烯醇为前体，催化合成维生素K2 (MK-3) 。每24 h 添加2% 甲醇时，NovQ
表达量提高约 36% 。考察摇瓶中初始 pH 、温度、甲醇添加量、前体 ( 甲萘醌、异戊烯醇) 添加量、催化时间、
十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB) 添加量等7 个因素对Gpn12 全细胞催化合成 MK-3 的影响，发现催化温度、甲
萘醌添加量、催化时间影响显著，对3 个显著因素进行响应面优化得出催化条件为：催化温度31.56 ℃，甲萘醌
添加量295.54 mg/L ，催化时间15.87 h，优化后的摇瓶MK-3 产量达到98.47 mg/L ，与响应面预测结果一致，较
优化前对照组提高了35% 。在30 L 发酵罐进行生物催化实验，催化时间24 h ，细胞催化剂浓度220 g (干重)/L ，
MK-3 产量达到 189.67 mg/L。该方法为Gpn12 规模化生产MK-3 奠定了一定的基础。
: MK-3 ，毕赤酵母，全细胞催化，优化
Received: April 13, 2017; Accepted: May 31, 2017
Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Proogram) (No. 2014AA021704), Anhui
Provincial Natural Science Foundation (Nos. 1308085MA07, 1608085QC46), Research and Demonstration of Key Technology of High Value
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