兔C反应蛋白与含模型受体的磷脂单层膜的相互作用.pdfVIP

维普资讯 错 学也 耘 第4o卷 第 20期 CHINESE SCIENCEBULLETIN 1995年 10月 兔 c反应蛋 白与含模型受体 的磷脂单层膜 m I51 的相互作用 7弓 肖才德 隋森芳 Q侈 (清华大学生物科学与技术系，生物膜与膜生物工程 国家重点实验室，北京 10](084) 高秋风 周晴中 (北京大学化学系，生物有机分子工程实验室，北京 100871) 关键词 兔∈垦壁兰皂 分子组装 睫脂 一蛋白相互作用 Ir_B膜 正常情况下动物血清 中只含微量 瓤 d麟 感 染等许多因素都能刺激肝脏合成CRP，使血清中的CRP含量成千倍地增加，当病情趋于好转 时 CRP的含量迅速下降到正常水平 ．兔 C反应蛋 白(RabbitC-reactiveprotein，0 P)的 分子量约为 100ku，由5个相同的亚基组成 ．5个亚基在平面上排列成～个 圆环，每个亚基 中 有一个结合磷酸胆碱 (PC)基 团的活性位点，PC结合位 点位于 c反应蛋白分子的同一面it]． CRP能够与细胞膜脂作用 ，与微生物细胞壁 中的多糖作用，所形成 的复合物能激活补体系 统、调节 巨噬细胞、淋 巴细胞和血小板的功能 ． 1 材料和方法 1．1 材料 二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺 (DMPE)，二硬脂酰磷脂酰胆碱 (DSPC)、Sepharose4B，Sepharo~e 4B--PE (PE，磷酸 乙醇胺 )、绵羊抗人 C反应蛋 白抗体均为 Sigma产 品；N 型单 晶硅片、TP-77 椭圆偏振仪分别 由北京金属研究院和北京照相机械研究所生产 ． 1_2 兔 C反应蛋 白的分离纯化方法 在家兔臀部肌 肉注射松节油 1mL，30h后从兔颈动脉取血，将血清收集在一起 ．首先用 Sepharose4B-PE按文献 [2]的方法亲和层析 ，磷酸胆碱洗脱；再让亲和层析产 品从直径 15mm 长度为 800mm 的Sepharo~e4B柱中流过 ，让血清淀粉样蛋 白(SenlIT1amyloidP，SAP)吸附 在柱上，分步收集得到兔 c反应蛋白．将分离出的CxRP产品装入透析袋，先放在EDTA-丁ris 缓冲液中透析，去除钙离子和磷酸胆碱 ；再将透析袋放人 0．15mol／LNaC1／H20 中透析后得到 产品．产品在 SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电泳一条带，与绵羊抗人 c反应蛋 白抗体在琼脂板上双 向扩散反应一条带 ．用紫外光吸收法测得产品兔C反应蛋 白含量为O．7mghTtL． 】994-】I-10收稽 ，19954)s~08收修改稿 ·联系 ^ 维普资讯 第 20期 科 学 通 报 l893 1．3 具有较长亲水极性头的两种合成磷脂分子Ds8PC DP3PC的合成方法 这两种人工磷脂分子是 ：① N-fN-(磷酸三 甲胺乙酯基 )T--酰胺 -N-基 卜天冬酸十八 烷 基 酯 内盐 (dioctadecanylN-IN -(trirnethylaminoethylphosphatoethy1)suceinamido-N-yl卜 aspartateinnersalt),简称 DS8PC，数字 8表示合成磷脂分子亲水极性头 中PC与二硬脂酰疏 水尾链