小球藻△12脂肪酸去饱和酶基因的克隆与序列分析.pdfVIP

研究报告 尺 县 小球藻 A12脂肪酸去饱和酶基 因的克隆与序列分析 迟晓元 ，路延笃 。，王 明清 ，卞曙光 ，杨庆利 ，秦 松 (1．中国科学院海洋研究所 ，山东 青 岛266071；2．山东省花生研究所 ，山东 青岛266100；3．中国科学院烟 台海岸带可持续发展研究所 ，山东 烟台264003；4．中国海洋大学 ，山东 青岛 266071；5．南京农业大学 ，江 苏 南京 210095) 摘要 ：利用 已报道的 △12脂肪酸去饱和酶基 因序列的保守区域 ，设计简并 引物 ，通过 RT—PCR的方法获得 了 小球藻 NJ一7的 内质 网型 △12脂肪酸去饱和酶基 因(CvFAD2)的部分序列 ，然后采用 RACE的方法分别克隆 到 5片段和 3，片段 ，拼接后设计特异引物扩增到全长cDNA。该基 因全长为2032bp，ORF为 1158bp，编码 385个氨基酸 ，分子质量约为 44ku 根据 已经得到 的 CvFAD2序列推导成氨基酸序列与一些 已知物种 的 FAD2氨基酸序列相 比较 ，同源性分别为普通小球藻 (Chlorellavulgaris)75 ，莱茵衣藻 (Chlamydomonas reinhardtii)57 ，石榴 (Punicagranatum)57 ，麻疯树 (Jatrophacurcas)52 。系统发育分析表 明，南极小 球藻 CvFAD2基 因与真核微藻(衣藻和普通小球藻)的FAD2基 因聚在一起 ，介于真菌与高等植物之 间，并 且真核微藻 FAD2基 因与高等植物 的同源性更高，推测其在进化上与高等植物的亲源关系更近 。 关键词 ：南极小球藻；脂肪酸去饱和酶 ；基 因克隆；序列分析 中图分类号 ：Q73 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3096(2009)08—0011-10 不饱和脂肪酸在生物体 的生命 活动中占有重要 desC基 因转入烟草植株 ，转基 因植株膜脂 中单不饱 地位 ，脂肪酸去饱和酶 (fattyaciddesaturase，FAD) 和脂肪酸含量隆低 。植株暴露于 1℃达 7d或者种 是不饱和脂肪酸合成途径 的关键酶，催化脂肪酸链 子在 10℃萌发并生长 70d都没有任何受伤症状 。 的特定位置脱氢形成双键_1]。动物 、植物和微生物 这说明烟草的抗寒性能在表达 了A9去饱和酶后大 等的膜脂中都含有特定的不饱和脂肪酸，它是机体 为提高 。 生物膜的重要组成成分 ，对生物膜结构 、机能、相转 Miyasaka等I5]发 现 ，在 Chlamydomonassp． 变、通透性 的调 节及 相关过 程 的调 控有 重要 作用 。 strainW一8O中，温度从 25℃降到 4C，低温处理 6h 并且 ，它参与细胞生物化学反应 、转运过程和细胞应 后 ，A12的转录水平达到初始转录水平的 2．3倍 ，而 激反应 ，影响脂肪代谢 、寻靶作用 、免疫反应 、耐寒 、 温度从 25℃升到 38℃ 6h后 ，A12的转录水平仅为 抗氧化等生理过程。此外 ，不饱和脂肪酸还是哺乳 初始转录水平 的 87 。在 ChlorellavulgarisIAM 动物体 内生成前列腺素、凝血 哑烷和 白三烯等激素 C-27中，两个定位于内质 网的脂肪酸去饱和酶 ，A12 的前体 ，具有提高人体免疫力 、预防心血管疾病和癌 和 A15，已经被 克 隆 出来 引。Zhou等 发现 ，在 症等重要的生理功能_2]。不饱和脂肪酸对于微 藻的 Pavlovasalina中，当温度 高于生长的最适温度时 ， 生长、呼吸和光合作用也起着非常重要 的作用 ，它的 A4、A5和 A8去饱和酶的表达水平增高 ，而温度低于 含量直接影响着生物膜的相变温度及膜上各种酶 的 最适温度时表