苦楝皮妊娠毒性作用及对妊娠早期小鼠子宫局部免疫状态的影响(1)研究.pdfVIP

苦楝皮妊娠毒性作用及对妊娠早期小鼠子宫局部 免疫状态的影响 翟向和1李清艳1富新城1刘占民1钟秀会2 (1．河北农业大学中兽医学院河北定州073000 2．河北农业大学动物科技学院河北保定071001) 摘要：给孕7d小鼠灌服苦棘皮(1：1)水煎荆，观察孕鼠的胚胎存活情况，免疫组化方法检测 子宫自然杀伤细胞数量，ELISA方法测定子宫匀裳中JFN—y，TNF—a含量。研究表明苦楝皮对妊娠 早期小鼠有明显的致流产作用，使子宫HK细胞数量，IFH—v、TNF—a含量显著升高，证明苦楝皮 致流产的机理与增强子宫局部的Thl反应有关． 关键词：苦楝皮小鼠帐细胞v一干扰素肿瘤坏死因子一Ⅱ流产 azedarach toosend 苦楝皮为楝科楝属植物苦楝树(ielia L．)及川楝树(JI,／ella Sieb．et Zucc．)的根皮及树皮。味苦、性寒，有毒，为杀虫燥湿之良药。主治蛔虫，亦 可驱蛲虫，治游风热毒、风疹恶疮及疥癣等症…。其主要药理成分为川楝索(Toosendanin)， 分子式C姐曲¨，分子量574，63。川檬素纯品为白色针状晶体，无色、无臭、味苦，最早 于1953年由四川省中药研究所提取，主要用来驱虫。国外很早就开始对楝科植物印楝 (Azadirachtaindica A．Juss)的研究，尤以印度对印楝的研究最为活跃和深入，发 现印楝素对妊娠有影响，可以导致大鼠妊娠100％终止“‘。川楝素和印楝索同属于四环三 萜类化合物，其化学结构及生物活性有许多相似之处。苦楝皮是否有妊娠毒性作用?其 毒性物质究竟如何影响子宫局部免疫细胞和细胞因子?二者有无内在联系?本研究主要 探讨苦楝皮的致流产作用及其对子宫局部免疫状态的影响。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1试验动物 选取8周龄未经产纯种昆明系小鼠，购自河北医科大学。常规饲养1周后，眼观检 查结合阴道涂片作发情签定。阴道涂片经姬姆萨染色，镜下观察全部为无核角化上皮细 胞定为发情，与公鼠1：1台笼过夜，于次日清晨检查，见有阴栓者记为孕Odo 1．2试验药品 小鼠TNF—n试剂盒，小鼠IFN—v试剂盒，小鼠抗人cDs，+I酬单克隆抗体，均购自北 京岳泰科技有限责任公司；生物素化山羊抗小鼠I酬，购自北京中山生物技术有限公司； 链菌亲和素一辣根过氧化物酶免疫组化染色超敏试剂盒，购自福州迈新生物技术开发公 ．63- 司；蛋白酶抑制剂(硎SF)，购自保定市海泰克生物技术公司：Paraplast包埋蜡，购自 美国sigma公司；多聚赖氨酸处理的载玻片和10％的小牛_咀清，购自博爱欣生物技术有 限责任公司；苦楝皮，从定州市大世界中药专桓购入，水浸lh后，水煎2次，合并滤液， 浓缩至lml含生药19。 1．2方法 1．2．1试验动物分组与处理 将孕7d小鼠随机分为2组，第1组为试验组，分别灌服苦楝皮水煎液0．5ml；第 2组为对照组，分别灌服蒸馏水0．5ml。分别于灌药后6、9、12、24 h剖杀小鼠。取右 侧子宫角匀浆，测定细胞因子的含量：取左侧子宫角用波恩液固定，做免疫组化试验。 I．2．2流产判定 胚胎体积变小、颜色紫黑、出血坏死、呈血团状、镜检无胎膜结构者为胚胎吸收或 死亡。胚胎个体大，粉红色，镜检胎膜及胎儿轮廓清晰，无出血、瘀血者为正常胚胎。 1．2．3切片制各 p 埋，制备5 m纵切组织片，粘贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上，56Clh烘千，备用。 1．2．4免疫组化染色 应用LsAB法(Labelledmethod)对CI)s,+NK细胞进行免疫组化染色 streptavidian “1。40X物镜下CD耵+阳性细胞总数(计数20个视野)。 1．2．5IFN-Y、TN卜q的测定 取右侧子宫，剪除子宫系膜及脂肪，纵向切开子宫，剥去胎儿，剪碎子宫角，加入5