蓝细菌Anabaena spstrain PCC 7120中一种新型蛋白激酶信号转导途径的初步探索研究.pdfVIP

“2006全国博士生学术论坛一中国生物多样性”论文集 PCC 蓝细菌Anabaena 7120中一种新型蛋白激酶信号转导途径的初步探索 sp．strain 程勇 王莉 陈雯莉 张承才 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉，430070 摘要蓝细菌爿nabaena PCC7120是一种丝状体革兰氏阴性细菌，该菌可以在缺乏化合态氮源的条件分化形成异形 sp．strain 胞——行使生物固氮的功能。基因组数据分析表明该菌的基因组拥有13个新型的蛋白激酶编码基因，这类新型蛋白激酶的 特点是：氨基端具有一个丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶保守结构域；羧基端端具有一个组氨酸蛋白激酶保守结构域，在两个保守 结构域之间还有GAF或PAS保守结构域．到目前为止，这类蛋白激酶的功能还未知。 Dot 本课题就是研究其中的两个基因pkn41(alr0709)和pkn42(air0710)的功能。RNABlot和RT．PCR实验证实这两个基因 的转录受缺铁的诱导，与培养基中何种氮源无关。这两个基因的ORF之间只有72bp的间隔，我们的实验结果证实它们在缺铁 条件下表现出共转录的特点。我们分别构建Tpkn41和pkn42基因的插入失活单突变体和基因敲除双突遍体，突变体表型分析 显示：在正常条件下，突变体的生长与野生型没什么差异，但是在有铁鳌合剂存在或者同时缺铁缺氮的条件下，突变体的生 长相对于野生型却被很大程度上的抑制了．随后我们测定了突变体细胞内铁的含量，结果显示突变体细胞内铁的含量明显低 于野生型细胞，除此之外我们还测定突变体细胞在缺铁条件下的色素蛋白含量，结果表明突变体细胞的色素含量低于野生型 pkn42基因参与细胞对缺铁的适应性调节。 关键词：AnabaenaPCC7120 sp．strain pkn41pkn42缺铁 PCC 前言：Anabaena 7120是一种革兰氏阴性蓝细菌，属于光能自养型，能够利用太阳光能进行光 sp．strain et PCC 合作用(Staniera1．，1977)。在环境中Anabaena7120可以利用多种氮源，如铵盐、硝酸盐和 sp．strain et N2(Wolka1．，1994)。在正常条件下，这种蓝细菌只有一种类型的细胞，即营养细胞。但是在缺少化合态 PCC 氮源的条件下，Anabaena 7120的5％一10％的营养细胞可以分化形成异形胞一一种终端分化 sp．strain ct 的细胞(可进行固氮作用)，以满足这个藻殖体生长的需要(Wolka1．，1994)，在功能和生理上这两种细 胞相互依存。由于AnabaenaPCC7120细胞类型的单一性，简化了研究的过程和复杂度，因此使它 sp．strain 成为很好的模式生物，被用于细胞的发育和分化研究。显示了AnabaenaPCC7120在硝酸盐和缺氮 sp．strain 条件下的细胞类型和异形胞细胞结构。 PCC7120 基因组测序的大量完成，为我们提供了丰富的基因组信息资源。在分析Anabaenasp．Strain 基因组序列的过程中，一类新型的蛋白激酶基因被发现，这类蛋白激酶的结构特征是：氨基端具有一个丝 氨酸／苏氨酸蛋白激酶保守结构域：羧基端具有一个组氨酸蛋白激酶保守结构域。这类蛋白激酶基因都很大， et eta1．，2002)