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食物不耐受检测试剂盒说明书.doc
食物特异性IgG抗体检测试剂盒
(酶联免疫法)说明书
【产品名称】
通用名称:食物特异性IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:
【包装规格】
18
【预期用途】
本试剂盒用于检测人血清中14种食物(鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹蛋清、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦)特异性IgG抗体。
该产品禁止用于健康人群体检食物
多年来,食物过敏和造成食物过敏性疾病的食物和食物添加剂一直是医学界关注的问题。常见的诱发过敏的食物包括牛奶、鸡蛋、小麦、玉米、巧克力、坚果、大豆和贝类食物。大多数属于同一种类的食物具有相同的致敏性,有时两种不同种类的食物也会引起交叉过敏反应。为减少食物过敏反应,建议食用熟食,原因是熟食的致敏性要低于生的食物。
多数食物过敏的患者表现胃肠道症状,包括恶心、腹泻和腹痛
【检验原理】
微孔板的反应孔内分别包被有食物。患者血清中的特异性抗体与食物抗原反应。清洗微孔板后去除反应过剩的血清蛋白。加入酶标记的抗体结合液,同抗原-抗体复合物反应。再加入偶联酶的生色底物,发生显色反应。测定反应产物的吸光度值,该值与食物特异性IgG抗体浓度成正比。
【主要组成成份】
本试剂盒提供的微孔板和试剂足以检测18位患者血清中14种食物特异性IgG抗体。包被有14种食物抗原(鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹蛋清蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦)
的微孔板 ...3 x 96孔
血清稀释液(绿色) 1 x 56 ml
清洗液(浓缩) 1 x 30 ml
食物特异性IgG抗体标准血清 1 x 1.0 ml
食物IgG抗体阳性质控 1 x 1.0 ml
抗人IgG抗体-辣根过氧化物酶结合液(红色) 1 x 40ml
底物液A3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB) 2 x 12 ml
底物液B过氧化氢 2 x 12 ml
终止液(H2SO4) 1 x 20 ml
【储存条件及有效期】
28℃保存有效期15个月。
【样本要求】
取0.02 ml(25μl)患者血清加到2. ml血清稀释液中,1:100稀释患者血清。。
【检验方法】
使用前请将所有试剂平衡至室温。
[试剂准备和贮存]
清洗液:将整个小瓶内的浓缩清洗液加入到蒸馏水中,使终体积为2000ml。标明此为工作清洗液,保存在2-8°C;此条件下,工作清洗液可保存6个月。
底物液:使用前30分钟将底物液“A”和“B”等比例混合(例如将底物液“A”和“B”各5ml混合后可用于1整块微孔板)。应弃掉未用的底物混合液。注意不要交换底物液的瓶盖。如果使用前底物混合液已显蓝色,则不能再使用。底物混合液在室温下可保存60分钟。
二.[试验操作]
1. 准备绘制标准曲线:
取4支12 x 75 mm玻璃管,分别标记50, 100, 200 和 400 U/ml。依次在这4个管中加入150 μl血清稀释液。在标有400 U/ml的管中加入150 μl 食物特异性IgG抗体标准血清(FOOD IgG POSITIVE CALIBRATOR)。混合后,取150 μl加入到标有200 U/ml的管中;再混合后,取150 μl加入到标有100 U/ml的管中;同样混合后,取150 μl加入到标有50 U/ml的管中。这样就得到了浓度分别为100, 200 和400 U/ml IgG抗体标准血清各150 μl,浓度为50 U/ml IgG抗体标准血清300 μl。这些浓度作为绘制标准曲线的横坐标。从每管中各取100 μl按下表加入到微孔板内:
管标号 反应孔号 50 U/ml 2A和8A 100 U/ml 3A和9A 200 U/ml 4A和10A 400 U/ml 5A和11A 在反应孔1A和7A中加入100μl血清稀释液,反应孔6A和12A中加入100μl阳性质控。
本试剂盒微孔板可拆分。沿中线将微孔板分成两块,用每半块微孔板均可检测标准血清、空白对照和阳性质控,并可根据检测结果绘制一条标准曲线;每半块微孔板可同时检测3位患者的标本。
2. 将100 μl稀释的患者血清(见标本预处理)加入到剩余反应孔内。所有反应孔的液体量必须为100 μl。
用封口膜或塑料袋封闭微孔板,置室温(22-25(C)孵育1小时。
孵育后,用300 μl工作清洗液清洗每个反应孔,需清洗3次(见试剂准备和贮存)。如果选用自动清洗 仪,请参照厂家说明进行3次循环清洗,并将清洗容量设为300 μl。
在所有反应孔中加入100 μl抗人 IgG抗体-辣根过氧化物酶结合液。
置室温(22-25(C)孵育30分钟。
重复步骤4清洗微孔板。
在所有反应孔中加入100 μl工作底物混合液(见试剂准备和贮存)。
封闭微孔板,置室温(22-25(C)孵育10分钟。
在所有反应孔中加入50μl终止液(此时反应孔中的溶液由蓝色变为黄色
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