深部感染真菌的微生物检验.docVIP

精品论文 参考文献 深部感染真菌的微生物检验 李晖 (黑龙江省鸡西市疾病预防控制中心 158100) 【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0111-02 【关键词】 深部感染真菌　微生物检验 深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见。组织胞浆菌为二柑性真菌，假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。 1 白色酵母菌 白色假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道黏膜上，当机体发生正常菌群失调或抵抗力降低时，可引起各种念珠菌病。 1.1 生物学特性 白色假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3～6mu;m。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。 1.2 微生物检验 (1)标本直接检验 1)直接镜检 取脓汁、痰和局部炎性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检。显微镜下见到革兰阳性、圆形(或卵圆形)菌体或孢子及假菌丝，即可确认假丝酵母菌感染。 2)抗原检测 取病人血清做ELISA、免疫印迹等法检测白色假丝酵母菌抗原。 3)核酸检测 用PCR法将假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏感性和特异性。 (2)分离培养与鉴定 1)普通培养 将标本接种于沙氏培养基上25℃或37℃培养1～4天后，培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。 2)芽管形成试验 将假丝酵母菌接种于0.2～0.5ml人或动物血清中，37℃孵育1.5～4h，镜检观察有无芽管形成。白色假丝酵母菌可形成芽管，但并非所有假丝酵母菌都形成芽管，其他假丝酵母菌一般不形成芽管。试验时应设置阴性对照(热带假丝酵母菌)和阳性对照(白色假丝酵母菌)。 3)厚膜孢子形成试验 将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基25℃孵育1～2天后，仅白色假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。 4)糖同化或发酵试验 假丝酵母菌，凡能发酵某种糖，一定能同化该种糖，故只需做那些不被发酵糖的同化试验。将培养物接种于糖发酵管，25℃孵育，一般观察2～3天，对不发酵管或弱发酵管可延长至10天或2～4周。同化试验所有的基础培养基含有(NH4)2 SO4、KH2PO4、MgSO4bull;7H2O、CaCl2bull;2H2O、NaCl和酵母浸膏，试验时分别加入各种糖。同时以葡萄糖和基础培养基作对照。观察结果时要观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。 5)动物试验 将假丝酵母菌1ml于家兔耳静脉或注射0.2ml于小白鼠尾静脉，观察5～7天，注意动物是否死亡。剖检时如发现脏器有多种小脓肿，即为白色假丝酵母菌。其他假丝酵母菌对动物无致病性。 2 隐球菌 隐球菌属包括17个种和7个变种，其中仅新型隐球菌及其变种有致病性，新型隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、口腔和肠道中。本菌属外源性感染，经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时可侵犯所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。新型隐球菌病好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。 2.1 生物学特性 新型隐球菌在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4～6mu;m，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌体大1～3倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。 新型隐球菌有明显的生物学多态性，有A、B、C、D四个血清型，在沙氏培养基上形成白色至奶油色粘稠菌落。 2.2 微生物检验 (1)标本直接检验 1)直接镜检 用病人脑脊液作墨汁负染色检查，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。 2)抗原检测 用乳胶凝集试验、ELISA、和单克隆抗体法等免疫学法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原。 3)核酸检测 临床可用脑脊液、支气管吸出物等，以DNA探针法检测，所用探针和引物选自其保守区的重复序列，具有高度特异性。 (2)分离培养与鉴定 1)分离培养 将标本接种于沙氏培养基上，病原性隐球菌在25℃和37℃孵育均可生长，而非病原性隐球菌在37℃时不生长。培养2～5天后观察菌落形态特点。 2)鉴定 ①酚氧化酶试验：将菌落接种于L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，经2～5天培养，新型隐球菌呈棕黑色菌落。用已知新型隐球菌和浅白