烧烫伤药膏无菌检查方法的建立.docVIP

精品论文 参考文献 烧烫伤药膏无菌检查方法的建立 杨铮 欧阳丽影 杨利红(通讯作者) （黑龙江省食品药品检验检测所 黑龙江哈尔滨 150001） 【摘要】目的 建立烧烫伤药膏的无菌检查方法。方法 按照《中国药典》2010年版附录的要求，采用薄膜过滤法进行无菌检查，冲洗液用量为每筒300ml，通过接种7株阳性代表菌进行方法学验证。结果 7株阳性代表菌株在试验组与阳性对照组均生长良好。结论 本法可消除烧烫伤药膏的抑菌作用，适用于该制剂的无菌检查。 【关键词】烧烫伤药膏 无菌检查 方法学验证 【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）09-0304-01 烧烫伤药膏对革兰阳性菌及革兰阴性菌均具有抑制作用，用于烧伤、烫伤、疮伤及碰伤等症状，是临床常用药物。为有效防止药品中的微生物直接进入体内，对机体造成损害，引发进一步的问题，为了使制剂临床应用能具有更好的安全性，因此，应对烧烫伤药膏进行无菌检查。根据《中国药典》2010年版[1]附录无菌检查的新要求及烧伤患者极易感染铜绿假单胞菌的临床现象，对烧烫伤药膏进行了无菌检查的方法学验证并在2010年版[1]附录无菌检查要求的基础上增加了铜绿假单胞菌。 1 材料 1.1 培养基与试剂 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、蛋白胨、肉汤培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、无菌十四烷酸异丙酯、聚山梨酯80。 1.2 菌种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]、生孢梭菌[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(F)98 003]。 1.3 样品 烧烫伤膏（佳木斯烧伤专科医院，批号20091006规格：50g/盒） 2 方法与结果 2.1 菌液制备 取经30～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤培养物各1ml、取经23～28℃培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁液体培养物1ml、30～35℃培养18～24小时的生孢梭菌的硫乙醇酸盐液体培养物1ml，分别加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中10倍依次稀释至浓度约为10～100cfu/ml；取经培养5～7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加入含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液5ml，将孢子洗下，摇匀，吸取1ml至无菌试管中，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至浓度约为10～100cfu/ml，备用。 2.2 样品溶液制备 取本品10盒，每盒以无菌操作方式称取1g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的容器中，充分振摇使供试品溶解，然后加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置，使油水明显分层，取其水层作为1:10供试液。 2.2 方法验证-薄膜过滤法 2.2.1 试验组：取1:10供试液70ml，转移至适量的0.1%无菌蛋白胨水溶液中，摇匀，分别置7个滤筒过滤（每筒含1:10供试液10ml），冲洗液用量为每筒300ml，分次冲洗并在最后一次冲洗液中分别加入1ml已制备好的上述7株菌菌液，再加入相应的培养基100ml，按规定条件培养3～5天，逐日观察。 2.2.2 菌液组：另取7个滤筒，加入相应的等量培养基，分别加入1ml各试验菌，按规定条件培养3～5天，逐日观察。 2.2.3 供试品对照组：取1:10供试液20ml，转移至适量的0.1%无菌蛋白胨水溶液中，摇匀，置2个滤筒中过滤（每筒含1:10供试液10ml），冲洗液用量为每筒300ml，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，按规定条件培养3～5天，逐日观察。 2.2.4 阴性对照组：取试验用0.1%无菌蛋白胨水溶液300ml，分置两个滤筒中过滤，再分别加入硫乙醇酸盐培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养3～5天，逐日观察。 表1 试验组与阳性对照组微生物生长情况 “＋”表示微生物生长良好，“－”表示无微生物生长。 2.4 讨论 人体皮肤上寄生着许