热疗联合５氟尿嘧啶影响胃癌MKN４５细胞的体外抑制、凋亡的研究.docVIP

精品论文 参考文献 热疗联合５氟尿嘧啶影响胃癌MKN４５细胞的体外抑制、凋亡的研究 张　祎１　杨卫东１　于惠玲２通讯作者 　　１．河北保定市第二医院　河北　保定　０７１０００;２．河北大学附属医院　河北　保定　０７１０００ 　　【摘要】　目的　观察５氟尿嘧啶(５－Fu)温热化疗对人胃癌MKN４５细胞的体外抑制、凋亡的效果.方法　根据预实验确定工作浓度.实验四组.MTT法检测细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和逆转录－聚合酶链反应(RT－PCR)观察细胞凋亡及对survivin和Bcl－２表达变化.结果　热化疗组对MKN４５细胞抑制、促凋亡作用最明显;热化疗组Bcl－２与survivin下调最显著.survivin与Bcl－２蛋白的表达呈正相关性,细胞凋亡率与两种蛋白表达负相关.结论　热化疗能增加对MKN４５细胞的抑制及凋亡作用,可能与下调Bcl－２和survivin的表达有关. 【关键词】　热化疗;　５氟尿嘧啶;　胃癌;　凋亡;　Bcl－２;　survivinTheinhibitiveeffectandapoptosisofGastriccarcinomacelllineMKN４５withhyperthermiaand５－Fuinvitro　ZHANGYI 　(MedicalOncology,secondHospitalofhebeibaoding,HeＧbeiProvince,０７１０００)【Abstract】Objective:Toobservetheinhibitiveeffect,apoptosisofMKN４５cellswith５－Fuandhyperthermia．Methods:MTTassaydeterminetheworkingconcentration．ThecellＧsweredividedintofourgroups．FCMandRT－PCRdeterminetheapoptosisrates,Bcl－２andsurvivinexpression．Results:５－Futhermo－chemotherapyshowedinhibitiveeffect、downregulateexpressionofthem．Thecorrelationbetweenthemispositive,apoptosisandprotionexpressionisnegative．Conclusion:５－Futhermo－chemotherapyinhibitcell,increasestheapopＧtosis,t【Khreoyuwgohrtdhse】down－regulationofthem． ５－Fu;thermo－chemotherapy;gastriccarcinomaA;bcl－２;survivinChineseLibraryClassification:R７３５．２R７３０．５８Documentcode:A 【中图分类号】R７３５．２ 【文献标识码】A 　　【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０３９１－０１ 　　导言近３O 年来,胃癌的发病率和病死率均居首位.恶性肿瘤的发展,是由于细胞的无限增殖、凋亡障碍所致.热化疗能明显诱导细胞的凋亡[１].survivin 和Bcl－２是主要凋亡抑制分子.该实验通过观察热化疗诱导胃癌细胞凋亡, 研究二者作用机制,为临床治疗提供实验依据. １　材料和方法１．１　药品与试剂　５氟尿嘧啶;四氮甲唑蓝;兔抗人survivin,Bcl－２单克隆抗体,羊抗兔FITC－IgG,RT－PCR试剂盒;引物. １．２　细胞培养　细胞接种于RPMI１６４０培养液中,３７℃恒温,５％CO２环境中培养,对数生长期细胞进行实验. １．３　细胞的分组与处理　对照组细胞３７℃常规培养;化疗组加入５－FU;热疗组４３℃水浴加温６０min(温度波动幅度le;plusmn;０．２℃);温热化疗组方法同上. 　　１．４　MTT法确定测定细胞增殖抑制率　将细胞以５times;１０４个??mL－１密度接种于９６孔培养板.２４h后加药和(或)加温,继续培养后加MTT,加二甲基亚砜,用全自动酶标仪测OD值,细胞增殖抑制率＝(对照组OD 均值－实验组OD均值)/对照组OD均值times;１００％(公式一). １．５　凋亡率的测定　收集各处理组细胞,以凋亡指数计算凋亡率.AI＝[细胞总数－(G０/G１＋S＋G２/M)各时相细胞数]/细胞总数times;１００％(公式二) １．６　测定Bcl－２,survivin的蛋白表达　取１ml单细胞悬液,分别加入１００mu;l兔抗人survivin和Bcl－２抗体和FITC－IgG二抗测蛋白表达量以均道值表示. 　　１．７　RT－PCR检测基因表达　提取细胞总RNA.