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分子生物学基本研究方法03.pdf
5.4.4 定点突变技术
（site-directed mutagenesis）
Introduce specific Point Mutations
(single base changes) into Cloned Gene.
• 目的：
• 通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码
的氨基酸序列。
• 应用：
• 研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质的结构、催
化活性以及结合配体能力的影响，
• 改造DNA调控元件特征序列，
• 修饰表达载体，
• 引入新的酶切位点等。
诱变寡核苷酸引物
应用DNA聚合酶延伸诱 含单拷贝野生型靶序列的 的 导 介 酸 苷 核 寡
单链重组M13DNA
变寡核苷酸引物
D
N
A
转染大肠杆菌，筛选携 术 技 变 突
带突变体克隆的M13噬
菌斑
纯化待筛克隆，序列分
析验证突变体
AGGCGGCTACGTGGCCTA AGGCGGCTAGGTGGCCTA
5 3 模板DNA
3 5
’
’
’ ’
引物变性和退火 F 重叠延伸介导的定点
5 FM 3 5 2 3’
’ ’ ’ 5’
3 5 3’ R 诱变
’ R2 ’
1 M 2
5 3’ 5’ 3 模板DNA分别和引物对1
’
’
3 5’ 3’ 5’ （正向诱变引物FM和反
’
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