负极性驻极体诱导3T3细胞表面电荷和游离钙浓度的变化研究.pdf

负极性驻极体诱导3T3细胞表面电荷和游离钙浓度的变化+ 江键1，崔黎丽2，宋诚荣1，王小平1，宋茂海1 (】．第二军医大学基础部数理教研室。上海200433；2．第二军医大学药学院无机教研室．上海200433) 摘要：本文选用一300V和一500V驻板体刺激成 细胞凋亡量，探讨细胞表面电荷和细胞内游离c矿 纤堆细胞(313细盹)24h和45h．通过细胞电泳技 浓度与细胞捅亡之问的相关性，为驻投体的临床应 术制定3T3细胞的表面电荷密度．利用Fluo—3／AM用奠定基础． ca2．指示荆，采用漉式细胞术测定313细胞内钙离 子柬度的变化乖3n知胞的撼亡量，探讨驻枉体请 2材料和方法 导313细胞凋亡与细胞表面电荷密度和游离钙浓度 变化之闭的关系．蛄果显示：(1)贲极性驻饭体作 2．1驻极体材料 用3T3知臆托减少撼亡细胞的表面电荷密度．(2) 驻极体材料选用美国杜邦公司生产的25Ⅳm聚 驻极体作用3”蛔胞后，细胞浆肄离钙离干浓度升 四氟乙烯(TeflonP1Ⅱ)商品膜．用152型电晕充电 系统(CORONATROkMonroe,Model152A,usA)对 高．钙离子难度的升高不是由于细胞内钙池的释放， 薄膜实施150℃高温恒压电晕充电．制成一300V和 而是由于蛔胞外钙离子内流所致．姑论：负极性驻 -500V驻柱体。其表面电位用补髅法测量(1soprobe 极体能减少3T3t田胞表面的电荷密度，谤导313细 Eleclrostat,ic V011metcr,type 244，USA)．常规消毒后 胞外的钙离子漉八细胞内，井由此诗导细胞凋亡． 备用· 关键词：驻极体；流式细胞术；钙离子；细胞拥亡 2．2细胞和细胞培养 1引言 小鼠胚胎成纤维细胞(yr3细胞-上海生物化学 研究所提供)，正常培井细胞为对照组，驻极伴作用 细胞表面电荷在细胞分化、细胞识别、细胞问 的细胞为实验组。取密度为(1×l护～l×10‘个，酬) 粘附、细胞吞噬、细胞凋亡及正常细胞向肿癌细胞 的对数生长期的细胞0．5m!．置于古新生小牛血清的 的转换中起着重要作用11J．电场对细胞作用的研究是 RPMI[640培养基中．在37℃、5％Cq条件下培养 生物物理学研究的重要手段之一-弱电场可以通过 2b后，把经过消毒的不同电位驻极体放入培井瓶中t 充电面作用于细胞．经过24h和48h后。收集细胞。 肌醇三礴酸、c矿、C-AMP、ATP等第二信使，影 2．3流式细雎术(Fa雌测Ca2*浓度 响细胞的代封，基因的表达，DNA-mRNA和蛋自 质的合成，爵的恬化、虞的离子通道和传输等Ⅲ·此 将3T3细胞用Krebs-Kinger缓冲泣配成l×106 个／mL细胞孟掖1mL加入Fluo·3／AM-终浓度为 外．胞浆游离钙离子在细胞信号的传递过程中也起 2000r／rain) 着根重要的作用．细胞浆辨商C．a2+浓度的升高不仅 3pmogL，室温下避光轻播30rain，辟心(r 5n血，去上清；Krebs-Ringef缓冲液