四环素类药物在水产品中的存在形态研究及其分析应用研究.pdfVIP

第41卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第 2期 2013年 2月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 273～277 DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．20525 四环素类药物在水产 品中的存在形态研究及其分析应用 高福凯 陈璐思 刘永明 刘振波 李桂芝 (烟台大学化学化工学院，烟台264005) 摘 要 采用紫外分光光度法研究了四环素类药物 (Tetracyclines，TCs)在不同pH条件下分子结构的变化 ， 用分子荧光法、高效液相色谱法(HPLC)探讨了TCs在蛋 白质基体中的存在形态，同时讨论了蛋白质对提取 水产品样品中TCs残留的影响。结果表明，TCs与蛋白质有较强结合作用；适当浓度 的(NH )：SO 与HPLC 流动相 (甲醇一乙腈一0．02mol／L草酸混合溶液，20：20：60， )混合提取液可引起蛋 白质缓慢且完全变性，导致 蛋 白质与TCs络合物离解，释放结合的药物，从而提高蛋白质样品中TCs残留提取的效率。本方法用于测定 水产品中的土霉素、四环素、金霉素和强力霉素 ，测定回收率为 88．2％ ～95．4％，RSD为 1-3％ ～4．9％，检出限 为 14．8～39．2ngg／。本方法操作步骤简单、快速、可靠。 关键词 四环素类药物；水产品；高效液相色谱 ；样品前处理；蛋白质变性 1 引 言 四环素类药物(Tetracyclines，TCs)因分子结构中具有共同的氢化骈四苯环而得名，其中最常见的 4种 TCs是：土霉素 (Oxytetracycline，OTC)、四环素 (Tetracycline，TC)、金霉素 (Chlortetracycline，CTC) 和强力霉素(Doxycycline，DC)。此类抗生素具有 良好的广谱抗菌性，被广泛应用于水产养殖…。 高效液相色谱法 (HPLC)具有 良好的精密度与选择性，被广泛应用于水产品中TCs残留的检测_2J。 水产品样品中微量药物残留与大量蛋 白质、脂肪共存 ，因此，其 中药物残留检测的关键是样 品前处理。 Anderson等对鱼肉组织中TCs残留检测的前处理方法进行了综述，主要方法有液液萃取法、固相萃取 和基质固相分散法等 。国家标准 GB／T21317-2007 用Na，EDTA—Mcllvaine缓冲液提取样品中TCs， 经过滤，上清液用HLB固相萃取柱净化。这些方法操作繁琐、耗时，易造成残留药物的损失。 研究 TCs残留在样品中的存在状态是发展样品前处理技术的理论前提。迄今为止，药残与基体的 作用对提取效率的影响尚未引起分析工作者的重视。已有研究表 明，TCs与蛋 白质有较强的结合作 用 。(NH )SO 水溶液可以使蛋 白质发生可逆变性、沉淀，常用于蛋 白质分离嘲，但作为药物残留提 取剂鲜有文献报道。本研究选择合适浓度的(NH )SO 溶液作为TCs残留提取剂，使蛋白质发生缓慢 且彻底的变性，以期提高TCs残留提取效率，建立了一种简单、快速、高效的前处理方法。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 CaryEclipse荧光分光光度计(美国Varian公司)；1100液相色谱仪 (美国安捷伦公司)；TU．1901紫 外可见分光光度计 (北京普析通用公司)；JJ-2(2003-61)组织捣碎匀浆机 (常州国华电器有限公司)。 TC，OTC，CTC和 DC标准 (纯度 92．0％ ～97．0％，中国药品生物制品检定所 )；鱼血清 白蛋 白 (FSA，烟台大学生命科学学院提供)，制备方法见文献[7]；PSA(N．丙基乙二胺修饰的硅胶)粉末、Clean— errNH SPE(氨基修饰的硅胶)粉末，均购于天津博纳艾杰尔公司；乙腈、甲醇 (色谱纯)；草酸和硫酸铵 (优级纯)；黄鱼和虾样 品购于当地市场 。 标准溶液的配制：TC，OTC，CTC和DC用 1．0mmol／LHC1溶液配制成浓度为 1000mg／L标准溶 液和混合标准储备溶液。 2012-05-22收稿 ；2012-09-12接受 本文系山东省 自然基金项 目(No．ZR201lBM009)