病毒滴度法观察目安眼膏抗单纯疱疹病毒的最佳浓度研究.docVIP

精品论文 参考文献 病毒滴度法观察目安眼膏抗单纯疱疹病毒的最佳浓度研究 张湘晖1 王适2 何群3 伍参荣3 谭涵宇3 姜宇3 赵碧清3 张健1 张明亮1 （1湖南中医药大学第一中医临床学院 湖南长沙 410007） （ 2 湖南中医药大学第二中医临床学院 湖南长沙 4 1 0 0 0 7 ） （ 3 湖南中医药大学 湖南长沙 4 1 0 0 0 7 ） 【摘要】目的 探索目安眼膏抗单纯疱疹病毒（HSV-1）作用的最佳浓度，为目安眼膏处方设计提供依据。方法 采用兔角膜上皮划痕法造模，将模型兔随机分为7组，每组4只（8只眼）。分别为：Ⅰ组～Ⅳ组：含0％、3%、5%、7%蜂蜜的目安眼膏；Ⅴ组：模型组；Ⅵ组：3%阿昔洛韦（A CV）眼膏；Ⅶ组：凝胶基质组，接种病毒后第9天，用病毒滴度法观察。结果 通过观察，含5％蜂蜜组的病毒抑制指数最高，即含5％蜂蜜的目安眼膏其对HSV-1的抑制作用最强。结论 目安眼膏抗HSV-1蜂蜜最佳浓度为5%。 【关键词】目安眼膏 蜂蜜 ACV HSV-1 病毒滴度 兔角膜上皮划痕法 【中图分类号】R969 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）01-0024-03 ACV是治疗单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）的首选药物，但ACV对角膜修复、愈合及再生能力欠佳，单用抗HS K药物很难控制病毒抗原引起的免疫性炎症反应。前期研究发现[1～3]，蜂蜜与A CV配伍制成的目安眼膏，既能增强治疗H S K的药效，又能提高角膜修复、愈合及再生能力，但药效与蜂蜜浓度有很大的关系，曾试用过含20%、15%、10%、5%、0%蜂蜜的目安眼膏，结果表明，蜂蜜浓度超过10%对眼组织刺激性大，不可行，5%蜂蜜的药效优于10%及0%（P＜0.05)，离体角膜渗透性试验亦证明5%蜂蜜与3%A C V配伍制成的目安眼膏渗透性最好，而5%蜂蜜是否为最佳浓度，还需进一步论证，故本文制备了含3%、7%蜂蜜的目安眼膏与原有的5%、0%蜂蜜的目安眼膏、市售阿昔洛韦眼膏(不含蜂蜜)比较，并用病毒滴度测定，为目安眼膏处方设计提供依据。 1 实验材料 1.1 实验动物 健康成年新西兰大白兔，雌雄各半，体重2.00～2.50k g，共28只（56眼），健康无眼疾，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供（动物合格证号scxk(湘)2006-0001）。 1.2 主要实验药品 3%阿昔洛韦眼膏(上海通用药业股份有限公司，批号080301)；紫云英蜂蜜(湖南省药材公司生产，经我院周日宝教授鉴定符合《中国药典》2005版一部规定)；阿昔洛韦(原料，湖北科益药业股份有限公司生产)；目安眼膏:采用蜂蜜与阿昔洛韦为主要成分，加入眼膏凝胶基质配制而成（实验室自制）；卡波姆－940、吐温－80、司盘－80、尼泊金乙醋，甘油，氢氧化钠，蒸馏水，皆符合药用规格。 生理盐水（武汉滨湖双鹤药业有限责任公司，080421405）；荧光素钠（湖南中医药大学附一医院药剂科提供）；表面麻醉剂（0.4％B e n o x i l溶液，日本参天制药株式会社生产）；H e l a细胞（湘雅医学院细胞中心提供）；0.1M P B S磷酸缓冲液：中南大学湘雅医学院电镜室提供；2.5％戊二醛固定液：中南大学湘雅医学院电镜室提供。 1.3 毒株 单纯疱疹I型病毒株，在非洲绿猴肾细胞中传代，50%感染单位(50%tissue culture infective dose,TCID50 )，由湖南中医药大学微生物免疫学教研室提供。造模所用的HSV-1的TCID50是100TCID5010-5.61。 1.4 主要设备、器材 透射电镜：H-600型，日本HITACHI公司生产。 2 实验方法 2.1 动物造模 造模方法参照角膜环钻压痕法[4]及上皮划痕法。造模操作：0.5％地卡因表面麻醉，6m m环钻在角膜中央作一压痕，并在其压痕内作“#”划痕（深度仅限上皮层），微量取样品25微升病毒悬液，滴入兔双眼结膜囊内，闭合眼睑并按摩1分钟，接种48小时后观察，动物均有畏光、流泪、角膜出现点状、树枝状和地图样着色及角膜基质深浅不一的水肿混浊，提示造模成功。 2.2 动物分组 按兔眼病情轻重分层，采用随机对照表法将模型兔随机分为7组，每组4只（8眼）。即：Ⅰ组：含0％蜂蜜的目安眼膏组（0%）；Ⅱ组：含3％蜂蜜的目安眼膏组（3%）；Ⅲ组：含5％蜂蜜的目安眼膏组（5%）；Ⅳ组：含7％蜂蜜的目安眼膏组（7%）；Ⅴ组：模型组：阴性对照组；Ⅵ组：3%阿昔洛韦