奶牛TLR2基因遗传变异与乳房炎体细胞评分的相关研讨.pdf

No．I Animal BulcSn 415 (October2006)V01．10 Bi触ology 奶牛TLR2基因遗传变异与乳房炎体细胞评分的相关研罗f 马腾壑1，许尚忠卜，王兴平L2高雪1，任红艳1陈金宝1 (1．中国农业科学院畜牧研究所，北京100094；2．西北农林科技大学动物科技学院， 杨凌712100) 摘要：选用中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛共207头奶牛为研究对象，采用 基因第2外显子上T／G，G／A和G／A3个突变，分别是EcoRV，／-／aelI和HhaI限制性内切酶 的酶切多态位点，其中T／G突变引起蛋白质氨基酸天冬氨酸／谷真．酸的变化。对3个酶切多态 位点进行基因型分析，x2检验表明：中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛在3个酶切多 SAS9．0软件，采用最小二乘拟合—般缌f生模型分析了3个酶切多态位点与中国荷斯坦奶牛、三 河牛和中国西门塔尔牛体细胞评分(SCS)的关系，结果表明：在这3个酶切多态位点中，只 明BB基因型可能为抵雇晤L房炎的有利基因型。 关键词；奶牛；乳房炎；TLR2基因；PcR-RFLP；体细胞评分 乳房炎(mastiffs)是～种常见的、复杂的、造成奶牛业经济损失非常严重的疾病【I～，仅通过普通的 药物治疗无法达到理想的效果。目前，奶牛乳房炎抗性的分子遗传学研究主要集中在对乳房炎抗病力的 receptor，TLR)，该受体可以识别病原体，在病原体入侵机体的早期即启动天然免疫，在抗感染中有重要作 用[3-4]。Ⅲ晨2是Toll样受体大家族中的第2个成员，具有广泛的识别谱，可对G+菌的胞壁成分肽聚糖 的分布相当广泛，在脾脏、外周血白细胞和乳腺组织高表达‘”1。牛TLR2基因定位在牛的17号染色体 [81。 据报刊川．体细胞评分和乳房炎之间的遗传相关在0,3～0．98之问“q，通过降低牛群中牛奶的体细胞 含量，可以显著降低牛群乳房炎发病率，并认为可以根据该项指标进行奶牛抗乳房炎性状的间接选择， 因此体细胞评分是目前对奶牛乳房炎进行监测最可靠的方法。 本试验通过研究中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛3个奶牛品种在TLR2基因的多态性， 以及TLR2基因多态性与不同奶牛品种的乳房炎体细胞评分之间的关系，以期刘奶牛乳房炎分子标记辅 助选择提供理论依据。 1材料与方法 1．1试验材料 ‘基金项目：国家高技术研究。863”计划(2002AA242011)，国家奶业重大专项(200(1：2BA518A14)。 作者简介；马腾壑(1980--)，男，河北石家庄。动物遗传育种与繁殖专业硕士研究生，研究方向：分子数量遗传学与家 畜育种。E-maih matenghe2005@yahoo．C012％Cll 通讯作者：许尚忠(1950一)，男，研究员，博导。研究方向：分子数量遗传学与家畜育种。TELl simmenta@rip．sina．conl 416 第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 本试验以207头奶牛为研究对象，其中包括61头中国荷斯坦奶牛，68头三河牛，78头中国西门塔 尔牛(分别来自西安草滩奶牛场、内蒙古海拉尔谢尔塔拉种畜场和通辽高林屯种畜场)。 采集颈静脉血样，ACD抗凝，冷冻保存带回实验室进行分析。采集新鲜奶样，低温保存，带回北 京市奶牛中心进行奶样分析。 1,2主要试剂 限制性内切酶(EcoRV、Haem，HhaI)购自宝生物工程(大连)有限公司。凝胶回收试剂盒购自北 京天为时代生物工程有限公司。 1．3PCR反应 1_3．1引物设计 利用Pl'inler TCAAATCACTGGACA 赛百盛生物工程有限公司合成。EcoRV位点的引物序列为L．5’AGG ATGTrr GTGTrr ATG3’，R：5’GAG CCCCAA 3’，目的片段为448bp,方法为PCR-RFLP：