双酶传感器法测定中草药中硫代葡萄糖苷含量研究.pdfVIP

双酶传感器法测定中草药中硫代葡萄糖苷含量 w-M．Lee2 M．RChoi2，Albert 武塞型1，张国梅1，双少敏”，Martin (1．山西大学化学化工学院，太原，030006； 2．香港浸会大学化学系，香港，九龙塘) 硫代葡萄糖苷(glucosinolates，又名芥子苷，简称硫苷)是一类化合物的总称，至今已 发现120多种，广泛存在于十字花科植物中。植物组织受到破坏后，硫苷和与其共存的 有水的条件下发生水解生成一系列化合物如葡萄糖、硫酸盐、异硫氰酸酯、恶唑烷硫酮 和腈类化合物等。硫苷在食品工业中占有很重要的位置。其水解产物可在食品中产生特 殊的风味，如芥末和辣根的辛辣味、雪菜的“雪菜味”等。另外，最近的研究表明，硫 苷及其产物还具抗癌的功效。 近年来，中草药由于其预防和治疗疾病的显著功效而引起人们的广泛关注。许多十 字花科植物的根、叶和果实作为传统的中草药具有镇咳、祛痰、利尿等功效，还可用来 治疗慢性支气管炎，风寒和肝炎i”。中草药中硫苷含量的测定可为其治病抗癌功效提供可 靠的化学依据，为中草药的深入研究开辟了一条新途径。本文首次采用双酶传感器法完 成了对传统中草药中硫菅含量的定量测定。 1．实验部分 1．1仪器与试剂 Pasco CI．6542溶解氧传感器和Science500数据处理系统(Pasco Workshop Scientific，Roseville，CA)，81—2型恒温磁力搅拌器(上海凯欣仪器厂)。 1．2实验方法 以戊二醛为交联剂，将葡萄糖氧化酶和葡糖硫苷酶以一定比例固定于新鲜鸡蛋壳膜 上。再将膜紧贴于氧电极的表面，用一个…O形环固定，即成酶电极。将电极浸入lOmL 被空气饱和的磷酸缓冲溶液(0．050M，pH=6)，搅拌条件下加入各种体积的黑芥子酶硫苷 酸钾标准溶液(O．05M)和待测溶液，电极电位的变化被输入计算机数据处理器中，并以 溶解氧浓度变化的形式输出。记录溶解氧浓度下降曲线，以标准曲线法测定硫代葡萄糖 苷含量。 2．结果与讨论 2．1双酶比例的影响 按葡糖硫苷酶：葡萄糖氧化酶的比例分别为I：I，2：1，4：1，6：1和8：1(质量比)制成酶 膜，覆盖在氧电极表面制成五种硫代葡萄糖苷酶传感器。通过试验发现，当双酶比例为 6：l时，既节约酶用量又能使传感器有良好的响应。故选择6：l为双酶最佳比例。 2．2pH对测定的影响 在DH为3．0-9．0的磷酸缓冲溶液中．分剧加入等量的黑芥子酶硫苷酸钾标准溶液进 行试验，结果表明，当pH为6．0时，传感器有最佳响应。 2．3激活剂抗坏血酸的影响 通过在底液磷酸缓冲溶液中加入一定量的抗坏血酸来考察抗坏血酸对硫代葡萄糖苷 酶传感器的激活作用。实验表明，抗坏血酸浓度在0-0．4mmol／L之间，传感器响应明显 增大，但当抗坏血酸浓度在0．4～0．8mmol／L之问，传感器响应趋于稳定，均为没有激活 mmol／L。但这 荆抗坏血酸存在时的4倍左右。因此，激活剂抗坏血酸的最佳浓度为0．4 种催化作用的具体机理仍不明确，虽有可能是在硫代葡萄糖苷酶、硫代葡萄糖苷和抗坏 血酸三者之问形成了一个兰重联合态，相当于亲核试剂一样催化反应的进行”】。 2．4离子强度对测定的影响 晦硫苷酸钾标准溶液，结果表明，随着离子强度的增强，溶解氧浓度下降值增大，但是 在缓冲溶液浓度火于50mmolfL时，响应时问变长．故实验中选用50mmolfL的缓冲溶液。 2．5温度对测定的影响 用恒温水浴控制10ml缓冲溶液的温度依次为25、35、45、55和65。C，分别加入等 最的黑芥子酶硫昔酸钾标准溶液，结果表明，在25．35C范团内，随着温度的升高，电极 响应增人，但是温度升高到55．65C范罔内时，响应值反而减小。这是因为温度升高到一 定程度仗酶蛋白变性而部分丧失活性的缘故。考虑到高温下恒温条什不好控制，且温度 较低时可延长传感器使用寿命。因此，实验-{，选用室温进行实验。 2．6电极性能(包括响应时间、线性范围、精密度和使用寿命) 在选定的最佳实验条件F，记录从加样到溶解氧浓度基本平衡时的