崔银秋-分子生物学-第八章-DNA复制.pptVIP

第八章: DNA复制 Meselson 和Stahl的实验 M. Meselson and F.W. Stahl. 1958. The replication of DNA in Escherichia coli Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 44: 671-682. M. Meselson 和 F. W. Stahl 很想想出一种办法来证明Watson 和Crick的半保留复制模型. 1957年, 他们成功获得了DNA半保留复制的实验证据. 他们是采取的密度梯度离心的方法. Their paper was published in 1958 and ever since, the experiment has often been referred to as: one of the most beautiful experiments in biology. A. The Meselson-Stall experiment B. the interpretation DNA 复制中的一些问题 酶 拓扑异构问题 方向问题: 半不连续复制 启动 DNA 合成的化学反应 DNA 多聚酶 DNA Polymerase 复制叉 The Replication Fork DNA 复制过程 原材料 反应方向 化学反应? 引导 DNA合成的力量 DNA 合成机理的图解 DNA 多聚酶 DNA 多聚酶 细菌的DNA多聚酶 DNA Pol III 全酶的组成 滑动夹 Sliding clamps 围绕新合成的双链DNA和与引物相连的聚合酶 确保了 DNA 与相同底物的再次结合，因此，增强了Pol的连续合成能力. 真核生物的滑动DNA夹是 PCNA 滑动 DNA 夹增强了连续合成能力 多聚酶开关 DNA Polymerase The specialization of DNA polymerases DNA 聚合酶手掌结构域 DNA 聚合酶 The specialization of DNA polymerases DNA rapid processive synthesis DNA 快速合成 DNA accurate synthesis DNA 精确合成 The Chemistry of DNA Synthesis DNA Polymerase The Replication Fork The Replication Process 复制叉 新合成的模板链和未复制的DNA双链的交界处 DNA 链增长的方式, II. 将新合成的短链结合在一起。 通过连接酶缺陷的T4噬菌体感染大肠杆菌   Kazunori Sugimoto, Tsuneko Okazaki, and Reiji Okazaki,  Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 1968 60: 1356-1362. 冈崎实验 这个实验清晰地证明了1000-2000-核苷酸片段的 “冈崎片段”. 这些碎片在DNA复制完成后加入正常的DNA。 根据冈崎的实验提出DNA复制遵循 “back and fill” 机理. Priming of DNA synthesis 复制过程 起始 增长 终止 复制起始 Initiation in E. coli Origins of replication 复制前复合物 pre-RC activation assembly of the replication fork in eukaryotes 前复制复合体（pre-RCs） 由两种蛋白激酶激活 (Cdk and Ddk) 这两种蛋白只有在细胞进入S期时才被激活. The Replication Process Initiation Elongation Termination The Replication Process Initiation Elongation Termination 端粒在DNA不连续复制中无法被完整保存下来 Telomeres cannot be maintained by semi-conservative DNA replication 端粒酶复制端粒 端粒酶延长了 3’ 末端 The Chemistry of DNA Synthesis DNA Polymerase The Replication Fork The Replication Process OriC in E. coli chromosomal DNA 起始子蛋白的三种功能: 结合到复制器, 弯曲/解开 一个 D