组织学技术教学课件.pptVIP

固定液的穿透力 脑组织脱水透明时间 70%乙醇(24h) 80%乙醇(24h) 90%乙醇(12h) 95%Ⅰ乙醇(12) 95乙Ⅱ醇(12h) 100%Ⅰ乙醇(4h) 100%Ⅱ乙醇(4h) 二甲苯Ⅰ15min 二甲苯Ⅱ15min 浸蜡3-4h 包埋 HE染色原理及配置方法 苏木精氧化后产生生物染料-氧化苏木红，后者与二价三价金属盐或氢氧化物结合形成带正电荷的兰色色精，只有在这种情况下才能与细胞中带负电荷的脱氧核糖核酸结合完成染色。 苏木精的配制 1.Harris苏木精液 苏木精2.5g，无水乙醇25ml 硫酸铝钾 50g蒸馏水500ml 氧化汞1.25g 冰乙酸20ml 配制方法 A液：将苏木精溶于无水乙醇中，加热至完全溶解。B液：将硫酸铝钾 溶于蒸馏水加热溶解。 A液到入B液中加热使溶液尽快沸腾去火缓慢加入氧化汞，防止溶液溢出。然后再煮1-2min 立即浸入冷水冷却后备用。临用时加入冰乙酸过滤即可。 注意事项 1.加热的A液到入加热的B液，防止液体喷出应缓慢多次到入，禁止在明火上操作。 2.加氧化贡时要少量多次缓慢加入，防止多量快速加入，避免液体溢出。也可将氧化贡溶解于10ml水中慢慢加入。 3.氧化贡加入后煮沸时间不要过长，防止过度氧化。 4.氧化贡若潮解游客里用药勺背压碎成粉末状加入。 5.如需自然氧化的苏木精不加氧化贡，3个月后用时加入冰乙酸20ml过滤后即可应用。 Harris改良苏木精液 苏木精2.5g，无水乙醇25ml 硫酸铝钾 17g蒸馏水500ml 氧化汞0.5g 冰乙酸5ml 配制方法 用烧杯将苏木精溶于无水乙醇中，加热至完全溶解。再用大烧杯取蒸馏水500ml加热至85℃ 时加入硫酸铝钾 ，待完全溶解后再加热至91℃ ，然后慢慢到入溶解苏木精乙醇液，让溶液温度保持在89-91℃ 之间再慢慢加入氧化汞，充分搅拌均匀持续1-2分钟后迅速入水冷却。临用时加入冰乙酸过滤即可。 注意事项 1.溶解硫酸铝钾 不要温度过高和长时间煮沸（硫酸铝钾是碱式盐，温度过高时间过长会造成碱式盐分解，金属铝析生成为氢氧化铝易产生混浊） 2.将氧化贡溶解于10ml水中慢慢加入较为安全。 3.整个过程用水浴加温容易控制温度。 无贡苏木精液 苏木精10g，无水乙醇200ml 硫酸铝钾 60g蒸馏水2200ml ，1%高碘酸80ml 配制方法 将苏木精溶于无水乙醇中，稍加热溶解。硫酸铝钾 溶于蒸馏水中，加热至完全溶解再将苏木精乙醇液倒入。加入1%高碘酸，迅速冷却后过滤即可应用。 伊红染色原理及配制方法 伊红是一种酸性胞质性燃料，在染料中加入适量的冰乙酸使胞质带正电荷，就可以被带负电荷的燃料染色。伊红在水中分解成带负电荷的阴离子与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而成使细胞质、红细胞、肌肉组织、结缔组织等被染成程度不同的红色与分红色。 伊红染液的配制 1.水溶性伊红液 伊红Y（水溶性）1克，蒸馏水100ml。 伊红Y溶于少许蒸馏水中，用玻璃棒搅拌溶解后加蒸馏水至100ml。 2.醇溶性伊红液 伊红Y（醇溶性） 1克，95%的乙醇100ml 伊红Y溶于少量95%的乙醇中，用玻璃棒搅拌溶解后，加95%的乙醇至100ml。 3.水溶性伊红乙醇液 伊红Y（水溶性）1g，蒸馏水75ml，95%乙醇25ml 。 伊红Y溶于少许蒸馏水中，用玻璃棒搅拌溶解后加入剩余蒸馏水，再加95%乙醇。 4.Sigma伊红水溶液，伊红1g，蒸馏水100ml 伊红防入蒸馏水中迅速震荡溶解后不用过滤，可立即使用。 苏木精伊红染色的年分化控制与反蓝 1分化的目的与控制 酸能破坏苏木精的醌型结构，分化就是用某些试剂（1%盐酸酒精）使色素与组织分离，将细胞核中结合过多的燃料、细胞质中吸附的染料及不需要着色的部位去除掉以利于伊红的染色。新鲜配制得分化液分化时间短一些，反之长一些。苏木精染色时间长分化时间长一些。分化到细胞核、核仁、染色质清晰可见。必须在显微镜的检测下控制分化，分化不可过度。分化适宜后迅速放入自来水冲洗去除酸后中止分化。 二、反蓝的目的与控制 苏木精染色后经1%盐酸酒精分化；切片是在酸性环境中 ，这时颜色是红褐色。切片进入弱碱性自来水冲洗或用返蓝液（0.5%氢氧化氨水溶液 ）在碱性环境中就会由红褐色变成蓝色。这是因为染料苏木红加铝，形成蓝色色精在环境中处于例子状态，此时为红色。在碱性环境中处于结合状态，呈蓝色。 三、分化液、返蓝液的配制 1、分化液 浓盐酸1毫升，70%乙醇99毫升 2、返蓝液 氢氧化氨0.5毫升，蒸馏水99.5毫升 HE染色出现的问题、原因、及补救方法 1.染色过程中切片易脱落 组织本身的原因：血块、血栓、过硬的组织、破碎的组织 补救方法：防脱片解决 2组织脱水、透明不足石蜡不能浸入组织发软切出的片子在脱腊时收缩入水