cAbl非受体酪氨酸激酶调节蛋白酶体的稳定性与组装机理研讨.pdf

I 摘要 c-Abl 非受体酪氨酸激酶调节蛋白酶体的稳 定性与组装机理研究 摘 要 c-Abl 非受体型酪氨酸激酶在哺乳动物等细胞中广泛表达，通过NLS 和NES 在细胞核和细胞质之间活跃穿梭。c-Abl 在不同的亚细胞结构定位具有相应的生物 学功能，通过蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA 之间的相互作用及其激酶活性在细胞 增殖、凋亡、DNA 损伤修复以及细胞粘附、迁移等过程中发挥重要的调控作用。 染色体易位产生的Bcr-Abl 和Tel-Arg 中的Abl 和Arg 组成型活化，是导致慢性粒 细胞白血病的主要原因。目前，对 Abl 激酶家族的研究主要集中在其作为癌基因 产物的致癌潜质上，而对c-Abl 和Arg 的正常生理功能及其与下游靶分子的相互作 用还知之甚少。 PSMA7 是蛋白酶体的α4 亚基，在蛋白酶体的组装及亚细胞定位等方面具有 十分重要的作用。通过酵母双杂交系统筛选c-Abl 相互作用蛋白，发现PSMA7 有 可能与c-Abl 相互作用。研究表明，c-Abl 可以抑制PSMA7 的泛素-蛋白酶体途径 降解；另外，c-Abl 通过PSMA7 亚基与蛋白酶体结合，使PSMA7 酪氨酸磷酸化， 进而显著抑制蛋白酶体的肽酶活性。本研究通过一系列免疫沉淀、免疫印迹、 GST-pull down 、LC-MS/MS 以及体内外泛素化分析实验证明，c-Abl 可以通过其激 酶活性调节PSMA7 的泛素化及SUMO 化修饰。进一步的研究证明，c-Abl 通过抑 制 PSMA7 亚基经泛素-蛋白酶体途径降解，可以提高蛋白酶体复合物的稳定，并 且Hsp90 、Tcp-γ 等分子伴侣可能参与这种稳定性调控。同时，我们发现乳腺癌易 感蛋白BRCA1 可以促进细胞内PSMA7 的泛素化修饰而导致其降解，而c-Abl 提 高BRCA1 在细胞内的表达水平。我们认为，c-Abl 一方面通过直接的相互作用来 稳定 PSMA7 ，另一方面，它可以通过提高 BRCA1 的细胞内水平来促进 PSMA7 的降解。c-Abl 激酶对蛋白酶体亚基的双重调控作用体现了其功能的复杂性和精确 性。 I c-Abl 非受体酪氨酸激酶调节蛋白酶体的稳定性与组装机理研究 本次研究首次分析了c-Abl 激酶对蛋白酶体亚基PSMA7 泛素化修饰及稳定性 的调节过程，并阐明c-Abl 通过PSMA7 来影响整个蛋白酶体复合物的稳定性及组 装的机理。蛋白酶体的降解活性对细胞的生命活动具有重要调节作用，因此本研 究对深入认识 Abl 酪氨酸激酶家族在正常细胞中的功能及致肿瘤机理具有重要意 义。 关键词：c-Abl 非受体酪氨酸激酶，PSMA7 ，泛素-蛋白酶体途径，泛素化 II Abstract Abstract The c-Abl non-receptor tyrosine kinase which is widely expressed in mammalian cell, can actively shuttle between nucleus and cytoplasm. The kinase in different subcellular location performs different biological functions. It has been implicated in the regulation of cell proliferation, survival, cell adhesion, and migration because of the interaction