D氨基葡萄糖盐酸盐体外对淋巴细胞的增殖和细胞内Ca2浓度的影响研究.pdfVIP

也々·土畦 套国喀耳生●杖术与露谆焉●曩术套议蔷文毒 20嘶量j哳 矿叩协 341213--dehydro 35 36 场群 40 8．1(h：lehydro 41 7．8-dehydro n氨基葡萄糖盐酸盐体外对淋巴细胞的增殖和细胞|内Ca2+浓度的影响 曾秀明12刘万顺2 徐海娇1 于蕾1 1哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物所 哈尔滨150076 2中国海洋大学生命学院青岛266003 摘-Jt-：为了研究D一氨基葡萄糖盐酸盐对淋巴细胞增殖作用的影响争机制，本文采用人外周血淋巴细 胞为实验材料，通过MTT法，流式细胞仪法研究了D一氧基葡萄糖盐酸盐对人外周血淋巴细胞增殖 和细胞周期分布的影响．同时采用荧光探针Furo．3／AM对细胞内的caz+进行标记，激光共聚焦扫描显 微镜扫描细胞的荧光强度。实验结果表明D一氨基葡萄糖盐酸盐能够通过ca2椎号通路激活人外周血 淋巴细胞，促使淋巴细胞增殖． 关键词：D一氯基葡萄糖盐酸盐淋巴细胞增殖细胞周期细胞内Ca2+ D一氨基葡萄糖盐酸盐(D--Glucosamine HydrochlorideGAH)是壳寡糖一种重要的衍生物，壳 寡糖是壳聚糖经水解后得到的产物。有体内实验研究表明壳聚糖、壳寡糖体内对小鼠体内特异性体液 免疫和细胞免疫的功能有调整作用…”3。有学者发现壳寡糖可增强体外培养的小鼠巨噬细胞IL--18 基因的表达，使细胞因子的转录翻译水平增高”1。 D．氮基葡萄糖盐酸盐对人体也有重要的生理作用。他能参与肝肾解毒．发挥抗炎护肝的作用： 刺激婴儿肠道中双歧杆菌的生长“3，对治疗风湿性关节炎和胃溃疡有良好的疗效”1。D一氮基葡萄耱 盐酸盐还应用在食品工业中．GHA是婴儿配方乳的一种重要微量糖类成分，还是合成VB6和核黄素 中间体的起始原料pJ。关于OHA对淋巴细胞活化的影响未见报道。本文采用流式细胞术和激光共聚 焦技术观察了D．氨基葡萄糖盐酸盐(GAH)对于人外周血淋巴细胞的增殖的细胞周期分布的影响和 淋巴细胞内C矿浓度的影响进行了研究。 l 材料 I．1药品与主要试剂：GAH有中国海洋大学生命学院海洋活性物质研究室提供，硫酸葸酮法测其纯度． 大于98％。MTT、PI、Knase酶、Fura (GIBCO公司)，人血清(哈尔滨市血站)。淋巴细胞分离液(天津灏洋生物公司) 1．2实验仪器：激光扫描共聚焦显微镜(LEICA COULTER公司)，C02恒温培养箱日本三洋公司恒温水浴箱厦门医疗电子仪器厂 163 t宁．王屯 奎国喀痒t格娃木暑露耳喃曲学术套议论文善 2006．8．2-6 2方法 2．】GIlA对人外周血淋巴细胞增殖的影响 人外周血淋巴细胞的分离：静脉采血法采健康献血者的静脉血，淋巴细胞分离液分离淋巴细胞， 实验数据进行t检验处理。 2．2GHA对人外周血淋巴细胞周期分布的影响 淋巴细胞分离方法如上，将细胞重悬于含有10％人血清的RPMIl640培养液中，调整细胞浓度 过夜，4C条件下Pl染色30rain．流式细胞仪对细胞进行细胞周期分析。 2．3GIlA对人外周血淋巴细胞细胞内ca2+浓度的影响 3次。将标记后的细胞用激光共聚焦扫描显微镜对其进行扫描观察，用488nm波长的激光作为激发波 confocal 长，515nm处探测荧光发射，选择贴壁良好的细胞进行检测，用Leica 件对扫描图像进行分析。用SPSSll．5软件对实验数据进行t检验处理。 3结果 3．1 GIIA对人外周血淋巴细胞增殖的影响 实验结果表明，当GAH浓度为200、100、50mg·L4有显著促进淋巴细胞增殖的作用。其中浓 度为100mg·Lo的作用最强。见表IGA