对于细胞冻存技术的了解与设想.docVIP

对于细胞冻存技术的了解与设想 与细胞冻存有关的文献着实不少，对象从《不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响》到《冻存人脐血间充质干细胞向类肝细胞的诱导分化》，从对于相关技术的研究《二甲基亚矾与甘油两种冻存保护液对细胞保护作用的比较》到实践探索《《8L-1的密度进行接种传代,细胞的增殖速度优于1×107L-1的接种密度。实验结果表明,将脐带血分离出的单个核细胞经贴壁生长,并传代纯化后,能获得均一生长的长梭形或多角形贴壁细胞,通过流式细胞仪鉴定,表明这些细胞97.9%表达CD44,可以初步判断为间充质干细胞。不过每份脐血中的干细胞收集量毕竟有限,为了满足研究及临床应用的需要,还必须解决其保存的问题。目前长期库存脐血造血细胞的唯一有效办法是加入细胞保护剂后深低温冻存,有报道大鼠骨髓间充质干细胞在液氮中冻存了6个月以后,细胞的形态及生长状况与冻存前比较,无明显差别。Lee等将冻存了0.5～1年的47份脐血和40份骨髓单个核细胞进行分离扩增培养,发现6代以前的脐血间充质干细胞增殖能力大于骨髓来源的间充质干细胞。本实验以1×109L-1的细胞密度进行冻存,用低浓度(10%)的二甲基亚砜作为冻存保护液,采用逐级降温的梯度冷冻法,将第6代人脐血间充质干细胞冻存于液氮中6个月。复苏以后发现,细胞的复苏率达60%～70%,细胞的形态及生长特性没有明显变化,仍然为梭形的细胞,贴壁生长,能形成细