水中大肠杆菌落的检测.pptVIP

水中大肠杆菌落的检测实验报告 ---生工093 胡丹，马超，杨骏 实验缘由 大肠杆菌是一组革兰氏阴性菌 大肠杆菌是人和动物肠道的正常菌群，多不致病，且在肠道中合成B族维生素和维生素K而被动物利用。有少数菌株可直接引起肠道感染，这些大肠杆菌称为致病性大肠杆菌，可导致水样腹泻，粪便中带有黏液，出血性结肠炎、严重腹泻和便血等疾病。 大肠杆菌主要来自人和动物的粪便 实验的缘由 上海是一个水质型缺水的城市，而作为水质检测的一个重要的标准----- 我国规定：每升自来水中大肠菌群数不能超过3个！ 坐落在奉贤的华理，我们美丽的校园的饮用水又是怎么样地呢? 实验目的 检测与我们华理学子息息相关的“水” 自来水 用实验结果来分析我们生活中的水存在的问题，给大家提出合理的建议 镜湖（水） 纯净水（饮水机中） 实验前的构思 一.采样。 二.检测样品中的大肠菌群。 三.结果的记录与分析。 四.根据实验结果反思，提出个人意见，方法改善我们的“水”环境。 实验过程 采集样品： 分别采集奉贤自来水约300ml，纯净水约300ml，镜湖水约200ml，密封保存，于第二日带至徐汇实验室。 实验过程 实验第一天： 1.配置培养基： 乳糖蛋白胨培养基 3倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基 伊红美蓝培养基（EMB培养基） 2.高温灭菌 培养基，平板，试管，无菌水，插针，锥形瓶，小套管，移液管 实验过程 3.无菌操作—初发酵实验： 自来水的初发酵实验： 取10支试管各装有5ml3倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养液，各加入10ml水样记做样品“Z”混匀后放入37℃培养箱中培养 纯净水的初发酵实验： 实验方法同自来水，样品记做“C” 湖水的稀释与初发酵： 往一试管中加入10ml湖水样品记做“H0”，另取10ml湖水样品加入90ml无菌水中进行第一次稀释记做“H-1”;在从已经稀释10倍的水样中取10ml加入90ml无菌水中进行第二次稀释记做“H-2”；依次获取样品“H-3”，“H-4”，“H-5” 对照实验： 取纯大肠杆菌接种于培养基液中进行对照实验 实验过程 实验第二天： 观察初发酵实验样品 对照样品 湖水样品 纯净水样品 自来水样品 实验过程 确定性实验： 保留未同时产气产酸的样品继续发酵，对已经产酸产气的样品，我们初步可知样品中含有革兰氏阴性菌 将已经产酸产气或仅产酸的试管中的菌液分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，于37摄氏度培养箱中培养 实验过程 实验第3天： 观察已经培养48小时的初发酵样品： 发现： 自来水中培养48h后仍然无气泡产生或只有一个小气泡----断定自来水中几乎无或有极少的大肠杆菌； 纯净水与湖水的样品和对照实验均有大量气体产生，和大量酸性物质产生，可进一步确定样品中有大量的革兰氏阴性菌，疑似为大肠菌群。 实验过程 观察培养24h后的确定性实验平板： 无论是对照实验，还是纯净水，还是湖水，培养基表面都产生了具有大量淡红色中心颜色较深的菌落，少数部位出现深黑色以及黄色和白色的菌落 实验过程 进行复发酵实验以验证大肠杆菌的存在： 选择具有大肠菌群特征的样品（1.深紫黑色，具有金属光泽的菌落2.紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落3.淡红色，中心颜色较深的菌落）取其一部分转接到含乳糖蛋白胨培养基的试管，放入37℃培养箱中培养 实验过程 实验第4天： 取又经过约12小时培养的平板样品进行涂片，用革兰氏染色剂染色并镜检 染色过程： 涂片 初染（草酸铵结晶紫） 媒染（路哥尔氏碘液） 脱色（95%乙醇） 复染（石碳酸复红） 实验过程 镜检： 标准结果 纯净水样品的镜检样子，影像较模糊不似大肠菌群 对照实验的镜检结果，有明显的大肠菌群的样子出现 实验过程 镜检： 湖水样品的镜检结果，有明显的大肠菌群样子 实验过程 观察培养24h后的复发酵实验结果： 对照实验产酸产气； 自来水产酸； 纯净水不产酸产气； 进一步证明自来水中没有大量大肠菌群存在；纯净水中检测出的革兰氏阴性菌不为大肠菌群 实验过程 观察培养24h后的复发酵实验结果： 稀释10倍的湖水与不稀释湖水产酸产气了 湖水中检测出的菌群应该为大肠菌群或主要为大肠菌群 实验过程 观察培养24h后的复发酵实验结果： 稀释100倍的湖水产酸产气了；但稀释1000倍和稀释10000倍的湖水样品未产酸产气 湖水中检测出的菌群应该为大肠菌群或主要为大肠菌群，稀释1000倍和稀释10000倍的湖水样品可能因为稀释过大而未产生现象 实验过程 最后，灭菌处理所有样品，培养基，平板等收拾好仪器结束实验 实验结果与分析 1.根据自来水初发酵未产酸产气，平板未有大量大肠菌落出现，复发酵也未产酸产气 可以肯定自来水中所含的大肠菌群很低很低 实验结果与分析 2.根据纯净水初发酵产酸产气，平板有一些疑似大肠菌落出现，复发也未产酸产气 估计纯净水中含有少量的大