油酸诱导建鲤cyprinuscarpiovarjian肝细胞脂肪-渔业科学进展.pdf

第38 卷 第2 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.38, No.2 2 0 1 7 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2017 DOI: 10.11758/yykxjz.20160112001 / 油酸诱导建鲤(Cyprinus carpio var. Jian) 肝细胞脂肪变性模型的建立* 1,2 1,2 1,2 3 3 杜金梁 曹丽萍 贾 睿 王 涛 顾郑琰 张春云3 3 1,2,3① 1,2,3① 骆仁军 徐 跑 殷国俊 (1. 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室 无锡 214081 ； 2. 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 农业部鱼类免疫药理学国际联合实验室 无锡 214081 ； 3. 南京农业大学 无锡渔业学院 无锡 214081) 摘要 通过对油酸诱导时间及有效作用浓度的研究，建立油酸致建鲤肝细胞脂肪变性模型。本研 究以胰蛋白酶消化法获得的原代肝细胞作为实验材料，加入不同浓度油酸(0、0.05、0.1、0.2、0.4、 0.8 mmol/L)与肝细胞共培养24–48 h ，诱导肝细胞脂肪变性，分别收集不同时段的肝细胞及上清液， 采用试剂盒测定肝细胞中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC) 的含量，同时测定上清培养液中谷丙转氨酶 (GPT) 、谷草转氨酶(GOT) 、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT) 、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD) 的 活性，MTT 法测定肝细胞的存活情况，确定油酸最佳诱导浓度，油红O 染色法观察细胞内脂肪滴 的形成情况。研究结果显示，0.4 mmol/L 油酸与肝细胞共培养48 h ，可以显著提高肝细胞内TG、 TC 含量(P ﹤0.05 或P ﹤0.01) ，极显著提高上清培养液中GOT、GPT、LDH 、γ-GT 的活性，显著降 低上清培养液中SOD 的活性，但与24 h 相比有升高趋势，0.4 mmol/L 油酸与肝细胞共培养24 h ， 光镜下可见细胞内有脂肪滴形成，以48 h 最明显。综上所述，油酸浓度0.4 mmol/L、诱导时间48 h 成功构建了肝细胞脂肪变性模型，为研究鱼类脂肪肝类疾病奠定了基础。 关键词 建鲤；肝细胞脂肪变性；油酸 中图分类号 S942 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2017)02-0107-07 近年来，鱼类脂肪肝的发病率呈不断扩大趋势。鱼 果得不到及时治疗，病鱼往往不久便会死亡，对养殖 类脂肪肝是养殖过程中的一种常见病，已知容易发生此 户造成很大的损失。肝脏是鱼体内重要的代谢器官， 病的鱼类有鲤鱼(Cyprinus carpio) 、鲫鱼(Carassius 肝脏如果发生病变或者损伤，常常导致机体抵抗力下 auratus) 、罗非鱼(Oreochromis sp.)等(赵蕾等, 2011)1) ， 降而易受传染病影响。关于鱼类脂肪肝的发病原因， 本病发病初期鱼类体型体色无明显变化，仅表现出食 有报道称其发病原因是由于营养不均衡造成肝脏脂 欲不振、生长速度缓慢等症状；一旦病情严重，鱼体 类代谢发生障碍，导致甘油三酯在肝细胞内异常堆积 色发黑、反应呆滞、昏迷翻转(彭勇鳌等, 2007) ，如 (王菊花等, 2008; 李秀梅, 2001) ；也有报道称是由于 * 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2015JBFM01) [T