抗猪流感病毒河南株单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立研究.pdfVIP

·p围畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会沦文集 抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 郑杰，卢中华，尹凤阁，杨霞，张红英 f河南农业大学牧医工程学院，郑州，450002) Influenza 猪流行性感冒，简称猪流感(Swine 的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。自1918年美国首次报道以来，已迅速在世界各地蔓延和流行， 可引起呼吸道细菌和病毒继发或混合感染，使疫情更为严重，造成猪只的死亡。同时，猪流感在禽一猪 一人的种问传播过程中，扮演着流感病毒中间宿主及多重宿主的作用。因此还具有深远的公共卫生意义。 由于本病的流行和危害日益严重，因此对猪流感病毒的研究已成为国内外兽医界、医学界和微生物学界 的热点之一。 在猪流感的诊断上。最可靠的方法是分离流感病毒，流感病毒是通过鸡胚分离的。通过鸡胚分离具 有实验周期长(大约需要1～2周)、灵敏性差、劳动强度大、细菌污染可能会干扰病毒的分离等缺点， 不利于猪流感的快速诊断。 国内外有部分学者采用RT--PCR的方法检测猪流感病原的存在，获得了较好的实验室检测效果， 然而由于该技术条件要求较高，且田问样本复杂多变，干扰大，样本处理难，因此大规模检测比较困难， 但是，如果与其它方法一同使用，仍不失为一种快速的检测手段。同时一般的基层单位经济拮据，购买 PCR仪有一定的难度，给此种方法的普及带来了一定的困难。 单克隆抗体在临床诊断和治疗中是非常有用的工具之一，研制SIV特异性单克隆抗体。便于对SIV 进行更深入的研究。本研究旨在研制出抗猪流感H。的亚型特异性单克隆抗体，建立一个快速、敏感、特 深入地研究、控制猪流感打下一定的基础。 同时猪是流感病毒的最佳实验动物。猪是人源、禽源和猪源流感病毒的唯一共同易感宿主，它能将 HINl等流感病毒传播给人或鸟类。很多人源甲型流感病毒株(甲型流感病毒是引起人类流感大流行的主 要类型)均可使猪人工感染，并且猪与人类有很多相近的生理生化指标，因而猪可作研究人流感的动物模 型。加强对猪流感的研究，也可以给人流感的研究带来一定的启示意义。 1、试验材料 1．1抗原的制备 1日龄的鸡胚，置37E的培养箱中继 按文献所述的方法，将1：2000倍稀释SIV河南株接种9—1 醇(分子量60001浓缩，以30000rpm超速离心3h，用无菌的PBS稀释沉淀物，一72℃保存备用。 1．2骨髓瘤细胞(sp2／o) 由河南农业大学牛业工程研究所惠赠。用HAT培养基检测为HGPRT一。 1．3动物免疫 53l 猪的重要瘦病防制研究新成果汇编 asma ae) 一、猪肺炎支原体(MycopHyopneumon 肺炎支原体是引起猪呼吸道疾病的主要原凶，感染后病猪千咳、低烧，生长缓慢；发病率高，死亡率 低。严重的是感染后，易继发其他细菌或病毒感染使病情加重，临床上出现呼吸困难，呈典型腹式呼吸， 有明显喘气现象，故也称喘气病。 原生质膜，故其形态是可变化的，有球状、环状、椭圆状等，体外培养营养需求很高，生长很缓慢；支原 体具有宿主特异性和组织专一性；猪肺炎支原体只会感染猪呼吸道，不会感染其他组织。 感染途径和临床症状：肺炎支原体主要存在于呼吸道气管和支气管中，会随病猪的鼻分泌物或咳嗽而 被排到空气中，再通过气溶胶或直接接触的方式而被健康猪摄入而感染，且任何日龄，任何品种的猪对支 原体都很易感；如果不采取积极措施，几乎所有的猪都会被感染。由于猪群抵抗力的不同，感染后临床症 状差异很大，支原体单独感染只造成轻度肺炎，猪表现出无痰千咳，当有人进入猪舍引起惊群或饲养员早 晨赶猪起来时，干咳症状就比较明显。肺炎支原体感染率很高，但死亡率很低，在猪场极少有单纯的支原 体感染，继发感染往往不可避免，经常能看到严重咳嗽，发热，消瘦或不食的病猪。支原体可通过空气传 播，很难隔离阻断传播途径，所以猪群感染率很高，支原体肺炎是全球养猪界公认的最难净化的猪病。 感染机理：众所周知，猪呼吸道本身有三道防线来阻止外源异物和病菌的侵入。第一道防线…鼻腔， 过滤阻