抗鸡γ干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨奢 可能是病毒数量少，诱导转录的时间短所致。实验证明．病毒通过尿囊腔接种鸡胚后，在24h内均处于“隐 蔽期”，24h后才开始增殖．之后随着病毒数量的增加而使鸡胚感染．这样可诱导IFN-r基因转录和表达 衡，我们认为应用鸡新城疫I系诱导鸡胚的最佳稀释度为50～100倍，最佳诱导时间为48h。 巴细胞对病毒的刺激感受较快．短时间内就有一定数量的IFN-?表达。综合上述结果我们认为，以5倍或 巴细胞提取RNA，则扩增更为简便有效。 利用鸡脾淋巴细胞体外培养诱导IFN叫基因转录，我们采用文献报道”1的最佳条件，日的是与我们的 方法进行比较。这种方法得到的mRNA扩增效果最好，但对于条件较为简陋的实验室较为困难。 应用鸡胚和成鸡诱导IFN．Y基因表达，选择适宜的病毒接种，在感染后一定时间内所转录的mRNA能 够满足实验需要。同时也阐明，鸡在胚胎时期在病毒侵入时就有一定的免疫能力。 参考文献略 抗鸡Y一干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定 戴华，焦新安·，潘志明，黄金林，胡茂志，唐伟 (扬州大学，江苏扬州225009) 摘要目的：制备抗鸡十干扰索单克隆抗体(mAb)。方法：应用淋巴细胞杂交瘤技术。以重组菌 检测抗原，制各抗鸡卜干扰素mAb；采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定rnAb的特异性。结果： 试验中，两株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN吖、 结论：成功地制备抗鸡T-干扰素的mAb，它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应 用价值。 关键词鸡—r．干扰素(IFN-7)：单克隆抗体(mAb) 干扰素(IFN)是在特定的诱生剂作用下，由细胞分泌的具有抗病毒、影响细胞生长分化、抗肿瘤和 调节免疫功能等活性的糖蛋白。根据IFN蛋白的氨基酸结构、抗原性和细胞米源，可将其分为I型IFN和 生，除了具有抗病毒、抗肿瘤活性外，更重要的是它还具有促进MHCII类抗原表达、．增强APt细胞与T 细胞相互作用、增强T细胞辅助抗体产生和细胞毒性T细胞产生能力等诸多免疫调节活性111，一直是现代 889 窒鱼堡銎堕 的研制很少见报道。本研究，我们制备了抗鸡Y-干扰素的特异性mAb．并对其生物学特性进行了初步鉴定， 它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。 I材料和方法 I．I材料 菌株BL21(DE3)(pET-ChlFNff)、BL21(pGEX BL21(pGEX 6P-1) 均为本室构建、保存。其中，BL21(DE3)(pET-ChlFN-7)、BL21(pGEX Pharmacia公司产品。低分子量标准 均为Sigma公司产品。RedipackGSTpurificationmodule为Amersham 蛋白、显色剂OPD、DAB为华美公司进口分装产品，其余常规试剂为国产分析纯。 1．2方法 1．2．1抗原刺备 mmol／L IPTG诱导、表达， 重组菌BL21(DE3)(pET-ChlFN-y)、BL21(pGEX6P-1．ChlFN-y)经0．1 超声波裂解，4℃离心5000r／rain，15 rain，前者取其裂解物沉淀(含包涵体)经适量PBS悬浮后，分光 光度计定量，作为免疫原，免疫动物；后者取其裂解物上清，亲和层析过柱纯化，作为检测抗原。两者均 置一20℃保存，备用。 1．2．2免疫动物 将上述抗原与等最容积的佐剂混合后免疫8wkBALB／c小鼠4只，首次免疫，抗原与弗氏完全佐剂乳 化后。腹腔注射抗原300ng，只；此