IBDV+VP3结构蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定研究.pdf

第27卷增刊 内 蒙古农业大学学报 VoI．2702S 2005年7月 Jul．2005 JournalofInner Agricultural Mongolia UniveIsity 文章编号：1009—3575(2005)02S一0115—03 IBDV VP3结构蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定+ AND EXPRESSIONIDENTlFICATIoNoFIBDVVP3 INE．Co￡i STRUCTURALPROTEIN 王选年1一． 张改平2．席俊2．保银梅1．唐海蓉1．李敬玺1。王新华1 (1． 河南科技学院动物科学学院，新乡453003； 2．啊南省动物免疫学重点实验室，河南省农业科学院生物技术研究所．郑州450002) 摘要： 达了355kDa和33kDa的鸡IBDVVP3蛋白。经SDS—PAGE和Western blotting分析，VP3表达产物以包涵体 形式存在，并与鸡IBDV抗血清特异性反应。 关键词：传染性法氏囊病病毒；VP3蛋白；表达；抗原性 部分中和性抗原位点。具有一定的免疫保护作用L2]。另外，VP3在病毒吸附细胞．及参与病毒的包装和稳定 成功的在大肠杆菌系统得到高效表达。为下一步研究IBDVvP3结构蛋白抗原表位的鉴定，探讨VP3在病 毒组装过程中的作用以及研制IBDV特异性检测试剂奠定基础。 l材料和方法 1．1质粒与菌株 Promega公司。 1．2主要试剂及工具酶 I、Not Marker、 DNA聚合酶、T4DNA连接酶，华美生物工程公司；限制性核酸内切酶EcoRI，DNA Taq I”G。promege公司。 1．3扩增目的片段所用引物 I、NotI酶 宝生物生物工程公司合成。为便于基因的克隆及构建表达载体等后续工作，在引物中引入EcoR 切位点。 P31：5’CCGGAATTCCGTTTCCCTCACAATCCAC3’ P32：57GOGCGCGGCCGc，rCACrCAAGGTCCTCA，rCAG3’ 1．4 VP3基因片段的扩增 应用RT—PCR试荆盒(Promega)，从组织中提取总RNA，并反转录成eDNA。 1．5 VP3基因与pGEM—T载体连接 ’望鍪最管；2国00寡5自-嘶拣科一2学O基童(∞1250”和河甫省高校燕出科研^才创新工程(2005KYc如08)资助 116 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 2005越 JMl09，重组载体命名为pTVP3。 1．6序列测定 重组阳性pTVP3质粒的序列测定由大连宝生物公司完成。 1．7重组表达载体pETVP3的构建 I和NotI 从pTVP3重组载体中扩增VP3基因，按文献【5J介绍的方法提取质粒pET一28a，进行Ec0R 切方法对重组子进行鉴定，重组质粒命名为pETVP3。 1．8 mmol／L VP3基因在大肠杆菌中的表达按(分子克隆实验指南》¨1的方法，用终浓度1．0 IPTG诱导 ern—blo