活血化瘀汤对体外培养成骨细胞骨形成功能的影响.docVIP

活血化瘀汤对体外培养成骨细胞骨形成功能的影响 专 业：中医骨伤专业 研究生：曾勤 导 师：张俐 副教授 摘 要 目的：观察中药活血化瘀汤对体外培养成骨细胞骨形成功能的影响，以探讨活血化瘀汤及活血化瘀法促进骨折愈合的作用机理。 方法：采用胰酶－胶原酶消化法从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞，进行原代、传代培养，取第二代细胞经过鉴定后作为实验模型，将不同浓度的活血化瘀汤提取液和载药血清与分离培养制得的新生大鼠颅盖骨第二代成骨细胞共同培养。提取液直接刺激实验和载药血清实验均按照设计分别用MTT法观察对成骨细胞增殖功能的影响(用波长490nm处OD值表示)和氨基安替比林测酚法(金氏法)观察对成骨细胞分化功能的影响(用碱性磷酸酶活性表示)；提取液直接刺激实验用茜素红染色法(ARS法)观察对成骨细胞矿化功能的影响(用每视野矿化结节数表示)。 结果：采用胰酶－胶原酶消化法，进行体外细胞培养，可以获得比较纯化的成骨细胞。加药培养3d后测定细胞增殖结果显示：一定浓度的活血化瘀汤提取液和载药血清均能促进成骨细胞的增殖。其中提取液实验在100-5000μg/ml浓度范围内的促进作用呈现剂量依赖方式，与对照组相比，100μg/ml和500μg/ml药液即可促进成骨细胞增殖,但与对照组比较差异不显著(P0.05)，1000μg/ml和5000μg/ml药液与对照组比较均有显著性差异(P0.05)，以5000μg/ml浓度最为显著(P0.01)，10000μg/ml浓度则呈现抑制作用。载药血清实验中10%与20%载药血清与空白血清对照组比较均有显著性差异(P0.05)。加药培养5d后测定碱性磷酸酶(ALP)活性结果显示：不同浓度的提取液和载药血清均能促进成骨细胞的分化，其中提取液实验中ALP活性与对照组比较以5000μg/ml浓度差异最为显著(P0.01)，载药血清实验中10%载药血清与对照组比较有显著性差异(P0.05)，而20%载药血清与对照组比较有极显著差异(P0.01)。加药培养18d后矿化结节计数结果显示：各浓度中药提取液组矿化结节形成数与对照组比较差异没有显著性(P0.05)。 结论：活血化瘀汤促进体外培养成骨细胞早期的增殖与分化从而促进骨形成。促进成骨细胞的骨形成功能是活血化瘀汤及活血化瘀法促进骨折愈合的机理之一。实验结果提示我们在临床骨折的治疗方法上应该分期辨证，活血化瘀汤适用于骨折的早期。 主题词： 活血祛瘀剂/药理学 细胞培养/方法 成骨细胞/药物作用 骨折愈合/药物作用　 大鼠 @活血化瘀汤 Effects of Huo Xue Hua Yu (HXHY) Decoction to Bone Formation Function of Cultured Osteoblast in Vitro Major: Orthopedics and Traumatology of TCM ?Postgraduate: Zeng Qin ?? ?Tutor: Prof. Zhang Li ABSTRACT Objective: To observe the effects of Huo Xue Hua Yu(HXHY) decoction to bone formation function of cultured osteoblast which was from the skull of newborn SD rat in vitro, in order to explicate the mechanism by which HXHY decoction and HXHY method act on fracture healing. Methods: To obtain osteoblasts from neonatal SD rat’s skull adopting the method of Collagenase－pancreatic enzyme digestion, conduct primary culture and sub-culturing，take the second generation cells as experimental model after identification, and then respectively culture these cells with different concentrations of the HXHY extracted fluid and drug-containing serum fluid together. Both of two experiment