流感嗜血杆菌检测案例.ppt

流感嗜血杆菌鉴定材料准备 流感嗜血杆菌标准菌株、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。 诊断流感嗜血杆菌试剂： 诊断血清；流感嗜血杆菌a－f血清试剂盒,乳胶凝集试剂盒， X和V因子试纸片： 细菌微量生化反应管：葡萄糖，木糖，乳糖，蔗糖，L-鸟氨酸,L-色氨酸，尿素，等 培养基的储备 ：选择性巧克力培养基（CAP），血琼脂培养基(BAP)，M－H琼脂培养基. 流感嗜血杆菌的基因组学研究进展 流感嗜血杆菌Rd 型是第一个被测序的细菌，基因组大小为1 830 137 bp，GC 含量为38 % ,TIGR 确认了1 473 个具有重要功能的基因. 毒力基因：编码脂多糖荚膜的基因、色氨酸代谢有关的基因tnaABC、使红血球凝聚的菌毛基因hifABCDE、黏附素、脂单糖的编码基因等 PCR检测 引物合成Hi 种特异性引物对(Hi- 1、Hi- 2)，273bp 文献：van Ketel, R. J., B. De Wever, and L. van Alphen. 1990. Detection of Haemophilus influenzae in cerebrospinal fluids by polymerase chain reaction DNA amplification. J. Med. Microbiol. 33:271-276. Hi 种特异性引物： H1F： 5′- ACTTTTGGCGGTTACTCTGT-3′, H1R： 5′-TGTGCCTAATTTACCAGCAT-3′, Hi 种特异性引物对(Hi- 1、Hi- 2) 流感嗜血杆菌与副流感嗜血杆菌的鉴别 文献：Detection of Haemophilus Influenzae by Loop Mediated Isothermal Amplication（LAMA） of the Outer Membrane Protein P6 Gene.jpn J.infect Dis.2007,60:55-58 引物序列： F1：5`－AACTTTTGGCGGTTACTCTG-3` R1：5`－CTAACACTGCACGACGGTTT-3` 流感嗜血杆菌 流感嗜血杆菌发展史 嗜血杆菌的原义是“在血液中生长的细菌”，是一类生长需要血液中的“Ｖ”和“Ｘ”因子的细菌 1892年波兰科学家首次分离。 1897年Grassberger 注意到在血平板上金黄色葡萄球菌周围的Hi 菌落较之稍远Hi 菌落增殖好而直径大,而远离金葡菌的无Hi菌落，这种现象称之为卫星现象。 1931年pittman阐述流感嗜血杆菌血清型特异性抗原是荚膜多糖.依据荚膜多糖的结构和抗原性分为六个血清型。 1974年开始在芬兰和美国推广使用Hib多糖疫苗， 1985年美国上市，适用于2-5岁的儿童。Hib 荚膜多糖蛋白结合菌苗(简称Hib 菌苗) 于1987年投放市场，针对18月龄以上儿童 ，欧美国家对出生2 个月的婴幼儿进行Hib 菌苗接种。 1976 年Kilian根据流感嗜血杆菌是否产生鸟氨酸脱羧酶 、尿素酶和分解色氨酸产生吲哚，将流感嗜血杆菌分为8个生物型。 1990年Ketel首次利用PCR方法检测流感嗜血杆菌种；1994年Falla利用PCR方法检测流感嗜血杆菌血清型菌株。 1995年流感嗜血杆菌全基因组序列测定完成，目前：86-028NP（不可分型），Rd kw20（d型） 流感嗜血杆菌病原学监测的意义（一） 可引起多种疾病 近年来发现流感嗜血杆菌与多种感染有关,是引起儿童细菌性脑膜炎、肺炎、上呼吸道感染最常见的病原菌,其感染对象主要是5岁以下婴幼儿。 在引起肺炎的革兰阴性菌中本菌处于前几位（绿脓假单胞杆菌，肺炎克雷伯杆菌，大肠杆菌），严重感染者导致脑膜炎。 鉴定困难 因其生长需要V 和 X 因子,且在37°C和5％CO2的环境中生长良好，加上分离与鉴定等技术上存在的问题,所以其分离率一直不高。 流感嗜血杆菌监测的意义（二） 流感嗜血杆菌的分离培养与鉴定，临床上没有作为常规检验项目，我国对其感染的情况没有确切数据。 国内文献报道的血清型的分布差异很大，一方面是由于存在着地区差异，标本采集的部位、采集的时间和标本的数量不同，但也不能排除使用的抗原诊断试剂不同和判断上的差异造成的。 文献检索到的流感嗜血杆菌病原分离地区（cnkd） 流感嗜血杆菌分离年代 健康儿童嗜血杆菌分离情况 患者痰咽拭子流感嗜血杆菌的分离情况 流感嗜血杆菌的血清型分布情况 未进行流感嗜血杆菌分离鉴定的情况 国内流感嗜血杆菌感染情况 1943年樊培禄首次报告由流感嗜血杆菌引起的2例细菌性脑膜炎病例。 1991－1992年沈舒庄、陆达林、杨永弘等分析我国部分地区细菌性脑膜炎，由Hib