应用特异PCR快速鉴定微生物肥料中4种乳酸菌.PDFVIP

微生物学通报 Apr. 20, 2014, 41(4): 674−680 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130336 简 报 应用特异 PCR 快速鉴定微生物肥料中 4 种乳酸菌 * 杨小红 曹凤明 关大伟 冯瑞华 陈慧君 李俊 沈德龙 马鸣超 ( 100081) 摘 要：【目的】植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 、鼠李糖乳杆菌(L . rhamnosus) 、嗜酸乳 杆菌(L . acidophilus)和德氏乳杆菌(L . delbrueckii)是微生物肥料生产中常用的乳酸菌，它们表 型特征相似，若采用传统方法鉴定则费时费力，为准确、快速地鉴定这些种，建立种特异PCR 方法。【方法】利用NCBI 中Primer-BLAST ( 引物设计和特异性检验工具) ，以GenBank 数据 库中上述菌种的recA 和gyrB 为靶基因，设计和筛选种特异性引物从而建立相应特异PCR 鉴 定方法。【结果】经过乳杆菌属(Lactobacillus) 、乳球菌属(Lactococcus) 、片球菌属(Pediococcus) 、 芽孢杆菌属(Bacillus) 、类芽孢杆菌属(Paenibacillus) 、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)和假单胞菌 属(Pseudomonas) 7 个属24 个种共40 株标准菌株的实验验证，4 个目标种分别扩增出唯一的 目的产物，而其他种均无目的扩增产物。采用建立的4 种特异 PCR 方法对产品中分离的 16 株乳杆菌进行鉴定，结果与 16S rDNA 序列分析、Biolog 鉴定结果一致。【结论】建立的特异 PCR 鉴定方法均具有较高的种内通用性和种间特异性，可快速、准确的用于微生物制剂中植 物乳杆菌、德氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌的检测和鉴定，具有较好的应用前景。 关键词：特异PCR ，特异引物，乳酸菌，鉴定，微生物肥料 Rapid identification of four lactic acid bacteria using specific PCR in microbial fertilizers * YANG Xiao-Hong CAO Feng-Ming GUAN Da-Wei FENG Rui-Hua CHEN Hui-Jun LI Jun SHEN De-Long MA Ming-Chao (Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Center for Quality Supervision and Test of Microbial Fertilizers and Mushroom Spawn, Ministry of Agriculture , Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China) Abstract: [Objective] Lactobacillus plantarum , L . rhamnosus, L . acidophilus and L . delbrueckii, which were widely used in microbial fertilizers, were indistinguishable from each other just