实验三(tong) PPT.pptVIP

操作内容 1.观察菌落特征（SS平板）。 2.将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜 面），37℃培养24h，观察结果。 2支/台 3.取可疑菌落做革兰染色。 1片/人 注意：按照上面的顺序依次进行实验。 注意！ 本次实验部分涉及生物危险(咽喉部及粪便中致病微生物)，请谨慎操作(无菌操作)！ 医学微生物学实验三（通） 3831082 　 内 容 提 要 一 观察细菌自然界分布和理化因素影响培养结果 （2学时 ） 革兰染色 二 肠道杆菌的鉴定（2学时）8支双糖铁、革兰染色 三 药敏试验（1学时）8个平板，菌液 一 观察细菌自然界分布和理化因素影响培养结果 （2学时 ） 菌落数量 菌落形态：包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透 明程度等。 如何观察平皿中的细菌菌落？ 3.紫外线灭菌效果观察 描述观察结果，分析原因。 4.咽喉部细菌的检查 α溶血，菌落周围形成朦胧不透明溶血环，多为条件致病菌。β溶血，菌落周围形成透明的溶血环，致病力强的细菌，引起多种疾病。γ溶血，菌落周围无溶血环，一般不致病 。 圆形、表面光滑、湿润、不透明的菌落 金黄色、 金葡在血平板上有溶血环（β溶血） S.aureas （透明溶血环） 金葡菌G+ 金黄色葡萄球菌G+ β-hemolytic streptococcus γ-streptococcus α-hemolytic streptococcus 灰白色、表面光滑,边缘整齐的菌落 血平板上有溶血现象 链球菌G+ 操作内容 从空气、咽喉及手指细菌平板中挑取菌落进行革兰染色，观察细菌形态，并记录结果（描述所取菌落形态和细菌形态）。 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 （3）革兰染色方法与步骤 1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸 吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 二 肠道杆菌的鉴定(2学时) （一）肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型副伤寒沙门菌 志贺菌属：痢疾志贺菌 肠杆菌科重要菌属及代表菌种 大肠杆菌: 生物学性状: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4 菌落特点： 圆形，凸起，灰白色，表面光滑，湿润，直径2-3mm。 伤寒杆菌 生物学特性: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4 菌落特点: 圆形,凸起,无色透明, 中等大小。 (1) 相似的形态染色—从形态上无法区别 中等大小的G-杆菌 多有鞭毛、菌毛 (2)活泼的生化反应 乳糖发酵试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 葡萄糖 + 乳 糖 - - 糖发酵实验 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 分子生物学 试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 （二）病原菌的检验程序 细菌在SS平板上的菌落特点： 1. 观察菌落特征 SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落 （黑色沉淀） 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 2.革兰染色观察形态 1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸 吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 3. 双糖铁培养基接种纯培养 原理： 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气 含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成