选修三 基因工程的基本操作程序.pptVIP

1、从基因文库中获取目的基因 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 DNA分子杂交、分子杂交、抗原-抗体杂交 3．如下图所示，两个核酸片段在适宜条件下，经X酶的催化作用，发生下述变化，则X酶是(　　) A．DNA连接酶　　　　　　　B．RNA聚合酶 C．DNA聚合酶 D．限制酶 A 4．下列不属于基因工程载体的是( 　　) A．质粒 B．细菌的拟核DNA C．噬菌体 D．动植物病毒 B * * 1.2 基因工程的基本操作程序 阅读课本P8-15，思考下列问题：3min 1、基因工程基本操作的四个步骤？ 2、获取目的基因的常用方法有哪些? 3、一个基因表达载体的组成有哪些物质？ 分别有什么作用？ 4、将目的基因导入受体细胞时，受体细胞有哪些？ 分别用什么方法导入细胞？ 5、用什么方法检测转基因生物染色体的DNA上是否 插入了目的基因？ 什么方法检测目的基因是否转录出了mRNA？ 什么方法检测目的基因是否翻译成蛋白质？ （1）.基因文库 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因组文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因 ② cDNA文库的构建----- 反转录法 目的基因的mRNA 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 2、利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________. ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制（或碱基互补配对） 目的基因DNA 四种脱氧核苷酸 一对引物 Taq聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 1、目的： 所需物质： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 三将目的基因导入受体细胞 （一）转化： 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞吸收DNA分子 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 动物受精卵 农杆菌转化法 植物细胞 植物组织培养 转基因植物 Ca2+处理 微生物 发酵 目的基因的 表达产物 显微注射 胚胎移植 转基因动物 原理：Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感 受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 导入微生物细胞 原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 过程： 四、目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入基因 是否转录 是否翻译 -----DAN分子杂交 -----分子杂交 -----抗原-抗体杂交 归纳步骤 归纳步骤 个体生物学水平鉴定 1970年，特明和巴尔的摩证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催