北京化工大学课件第三章2 高效液相色谱.pptVIP

高效液相色谱;2;高效液相色谱;一、概述 － 定义;一、概述 － 特点;GC与HPLC比较;（一）分配色谱;（一）分配色谱 – 分离原理;（一）分配色谱- 固定相;R --- 极性基团 疏水基团;HPLC的固定相的化学构造;;（二）吸附色谱 – 分离原理;（二）、吸附色谱- 固定相;（三）、离子交换色谱;分离对象;（四）排阻色谱法 ;1. 软凝胶：铰链葡萄糖的多孔聚合物，聚丙烯酰胺凝胶。（凝胶过滤色谱）;高分子化合物分子量及分子量分布 DNA碎片不同碱基支链分离。;极性;流动液贮存提供脱气 输液泵 进样系统 分离系统 检测系统 控制与记录系统 ;LC 系 统;25;1. 流动相贮存与脱气 ;2. 输液系统 ;活塞泵工作原理;注射泵 ;3. 进样系统;样 品 环;4、色谱柱;常用的柱子;微柱;保护柱（guard column);5. HPLC 检测器 ;常用LC检测器 ;（1）吸光检测器;流通池;Tungsten lamp;Time;;90% MeOH 0.5 mLs/min; 振动弛豫 内转移 荧???发射 系间窜跃 磷光发射 外转移; 荧光强度与溶液浓度的关系： 荧光强度正比于吸收的光量与荧光量子产率F I f = F I a I f --- 荧光强度 Beer’s Law: Ia = I0 –It = I0(1-10-elc) I 0 _--- 入射光强度 ；I t ---透射光强度 elc≤0.05, e-2.3elc = 1 – 2.3 elc If = 2.3 F Io elc If = Kc;（2）荧光检测器;（3） 折光检测器;(4) 蒸发光散射检测器;（5）电化学检测器;四、HPLC分离利用;用反相液-液色谱分离稠环芳烃;三聚氰胺的HPLC图谱;色谱分析法小结;分离条件的选择;应用 定性方法 (纯物质对照, 保留值对照) 定量方法 (归一化, 外标, 内标) ;液相色谱;;;