微生物学 第四节 培养基.ppt

第四节 培养基(medium); 培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确） 营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） 物理化学条件适宜（条件适宜） 根据培养目的选择原料及其来源（经济节约）;;●浓度过高——微生物的生长起抑制作用， 浓度过小——不能满足微生物生长的需要。 ●碳氮比（C/N）:直接影响微生物生长与繁殖及代谢物的形成与积累，常作为考察培养基组成时的一个重要指标。碳氮比随碳水化合物及氮源的种类以及通气搅拌等条件而异，很难确定一个统一的比值。 ; ●速效性氮（或碳）源与迟效性氮（或碳）源的比例 ●各种金属离子间的比例; （1）pH：各类微生物的最适生长pH值各不相同： 细 菌：7.0~8.0 放线菌：7.5~8.5 酵母菌：3.8~6.0 霉 菌：4.0~5.8 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，培养基的初始pH值会发生改变，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式： 内源调节：在培养基里加一些缓冲剂（K2HPO4和KH2PO4 ）或不溶性的碳酸盐（CaCO3）。 外源调节：按实际需要不断向发酵液流加酸或碱液。;水分活度： （water activity，aw）;各种微生物对培养基的氧化还原电势的要求： 好氧微生物：+0.3~+0.4V，(在0.1V以上的环境中均能生长)。 厌氧微生物：只能在+0.1V以下生长。 兼性厌氧微生物：+0.1V以上呼吸、+0.1V以下发酵。 培养基是多氧化还原偶的复杂电化学系统，测出的Eh值仅代表其综合结果。 对微生物影响最大的是：分子氧和分子氢的浓度。 培养基中常用的还原剂：巯基乙酸、抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等。;该培养基的应用目的，即： 是培养菌体还是积累代谢产物？ 是实验室种子培养还是大规模发酵？ 代谢产物是初级代谢产物还是次级代谢产物？ ;1. 生态模拟：调查所培养菌的生态条件，查看“嗜好”，对“症”下料——初级天然培养基。 2. 查阅文献：查阅、分析文献，调查前人的工作资料，借鉴人家的经验，以便从中得到启发设计有自己特色的培养基配方。 3. 精心设计：借助优选法或正交试验设计法等方法。;4、实验比 较： 不同培养基配方的选择比较 单种成分来源和数量的比较 几种成分浓度比例调配的比较 小型试验放大到大型生产条件的比较 pH和温度试验;高压蒸气灭菌： 一般培养基： 1.05 Kg/cm2, 121.3℃, 15～30 min。 含糖培养基： 0.56 Kg/cm2, 112.6 ℃, 15～30 min。 干热空气灭菌： 160℃， 2 h。 过滤灭菌，分别灭菌， 间歇灭;;②合成（组合）培养基(synthetic medium)：也称作chemically defined medium. 由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，该类培养基的组成成分精确、清楚，重复性强，但微生物生长较慢，且价格昂贵，故一般适于在实验室范围内有关微生物营养需要、代谢、分类鉴定、生物测定以及菌种选育、遗传分析等方面的研究工作。如高氏培养基、察氏培养基等。 ③半组合培养基(semi-defined medium)：在合成培养基的基础上添加些天然成份，以更有效地满足微生物对营养物的需要，如马铃薯蔗糖培养基。;①液体培养基(liquid medium)：液体培养基不含任何凝固剂，菌体与培养基充分接触，操作方便，常用于大规模的工业生产以及在实验室进行微生物生理代谢等基本理论的研究工作。可据培养后的浊度判断微生物的生长程度。 ②固体培养基(solid medium)：天然固体营养基质制成的培养基，或液体培养基中加入一定量凝固剂（琼脂1.5～2%)而呈固体状态的培养基。为微生物的生长提供营养表面。常用于微生物的分离、纯化、计数等方面的研究。可依使用目的不同而制成斜面、平板等形式。;③半固体培养基(semi-solid medium)：在液体培养基中加入0.2～0.7%的琼脂构成的培养基。常用来观察细菌运动的特征，以进行菌种鉴定和噬菌体效价滴定等方面的实验工作。 ④脱水培养基（dehydrated culture media）：脱水商品培养基，预制干燥培养基，指含有除水以外的一切成分的商品培养基，使用时只要加入适量水分并加以灭菌即可，是一类既有成分精确又