第一章 4.基因组的复制.ppt

逆 转 录(Reverse Transcription) 逆转录：以RNA为模板生成DNA的过程 逆转录酶（Reverse transcriptase) 某些病毒DNA的复制 逆转录 逆转录酶 逆转录酶： 依赖RNA的DNA聚合酶活性 RNase H活性 依赖DNA的DNA聚合酶活性 RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 意义：发展了中心法则，RNA也有遗传功能 第一章 4. 基因组复制 Institute of Genetic Engineering 基因组的复制 基因组DNA复制的基本过程和共同特点 原核生物DNA的复制 真核生物染色体DNA的复制 某些病毒DNA的复制 复制的几种方式 线性DNA双链的复制 环状DNA双链的复制 复制可分为起始、延伸和终止三个阶段 多个复制起始点形成多个复制子，复制起始点往往富含AT碱基 复制中多种蛋白的作用类似原核DNA复制所需蛋白，但机制更为复杂 复制过程涉及核小体的解体和重新生成，后续链中冈崎片段的长度就是一个核小体所含的DNA片段长度 真核生物的DNA复制概况 真核DNA复制的酶学 已至少发现5种：DNA-pol α,β,γ,δ,ε DNA-pol α：起始引发，有引物酶活性 DNA-pol β：参与低保真度的复制 DNA-pol δ：主要的催化酶，有解螺旋酶活性 DNA-pol ε：校读、修复和填补缺口作用 DNA-pol γ：在线粒体DNA复制中起催化作用 Pol ?（或Pol ?） 填补冈崎片段之间的空隙 DNA连接酶Ⅰ 封闭缺口 RPA 稳定解旋后的单链DNA 解旋酶 复制叉的形成和移动必不可少 拓扑异构酶 释放复制叉前进时产生的扭曲应力 真核生物复制过程中的酶及功能 POLIII, b subunit PCNA 2、复制的延长 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 随从链 引物 核小体 DNA复制与核小体装配同步进行，复制完成后随即组合成染色体并从G2期过渡到M期 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接 染色体两端DNA子链上最后合成的RNA引物，去除后留下空隙。 3、复制的终止 双向复制 半保留复制 半不连续复制 真核生物线性DNA的复制泡 复制过程中核小体的装配 末端缩减 末端缩减 线性DNA 末端的复制 端粒(telomere) 指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构 功能 ? 维持染色体的稳定性 ? 维持DNA复制的完整性 结构特点 ? 由末端单链DNA序列和蛋白质构成。 ? 末端DNA序列是富含G、T短序列的多次重复 TTAGGGTTAGGGTTAGGG… 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 由450个核苷酸组成，模板区为CUAACCCUAAC 端粒酶协同蛋白 (human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶 (human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 组成 功能 提供RNA模板 催化逆转录 端粒酶的催化延长作用 爬行模型 四膜虫端粒酶对端粒DNA的复制 DNA聚合酶完成末端双链的复制 母链延长至一定长度后，端粒酶脱离母链，母链以其3`-OH反折，同时起引物和模板的作用 游仆虫属 端粒是染色体末端的一种特殊结构，在正常人体细胞中，可随着细胞分裂而逐渐缩短. 端粒是细胞必需的遗传组分，因为它能够保护和补偿染色体末端遗传信息的丢失，保护它不会被核酸酶识别而免遭降解. 但是在复制过程中，端粒也因为复制机制的缺欠或者其他原因会缓慢地丢失.在新细胞中，细胞每分裂一次，染色体顶端的端粒就缩短一次（细胞分裂一次其端粒的DNA丢失约30～200bp），当端粒不能再缩短时，细胞就无法继续分裂了。 在高等真核生物，端粒酶只在胚胎细胞及需要频繁增殖的细胞（比如免疫细胞）中有活性，而成年组织细胞中没有活性或活性极低。 大约90%的肿瘤类型发现有端粒酶活性 端粒酶与细胞的永生性（immortalization）及肿瘤发生（tumorogenesis）都密切相关。 应用： 针对端粒酶的肿瘤治疗， 抗衰老 复制的起始 起始点比E.coli的ori C短 复制单位多 复制的起始需要DNA-pol α（引物