利用日本血吸虫重组信号蛋白1433检测血吸虫抗原及抗体的研讨.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：制备日本血吸虫（中国大陆株）重组信号蛋白 14-3-3 （rSj14-3-3 ），并制 备抗rSj14-3-3 蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，探讨纯化的rSj14-3-3 蛋白及其 相应的单克隆抗体和多克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。 方法：通过对含 有重组质粒pET28a-Sj14-3-3 的工程菌E.coli BL21 的诱导培养，制备rSj14-3-3 蛋 白，以蛋白纯化试剂盒（His-Bind Purification Kit ）予以纯化，获得高纯度的 rSj14-3-3 蛋白，以纯化后的rSj14-3-3 蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠，用杂交瘤技术 制备抗rSj14-3-3 蛋白的单克隆抗体并予以纯化。通过间接ELISA方法测定单克隆 抗体的效价，并用Western blotting鉴定单克隆抗体的特异性。同时，以纯化后的 rSj14-3-3 蛋白为抗原免疫家兔，制备抗rSj14-3-3 蛋白的抗血清并予以纯化，制 备相应的多克隆抗体，用间接ELISA 法测定多克隆抗体的效价。以纯化的 rSj14-3-3 抗原用间接ELISA法分别对 30 例急性血吸虫病患者、30 例慢性血吸虫 病患者和 50 例健康人血清中的特异性抗体进行检测；用纯化的抗rSj14-3-3 多克 隆抗体为捕捉系统，以辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体HRP-1D4 为检测系统 的酶联免疫吸附试验检测上述急、慢性血吸虫病患者和健康人血清中的循环抗 原。 结果：获得了高纯度的rSj14-3-3 蛋白抗原；筛选出了能够稳定分泌抗 rSj14-3-3 单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1D4，其单克隆抗体的亚型经鉴定为IgG1 ， 7 以上。通过间接ELISA法分别对 30 例急性血吸虫病患者和 30 抗体的效价在 10 例慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体进行检测，阳性率分别为 100%（30/30 ） 和 96.7% （29/30 ）；双抗夹心ELISA法分别对上述急、慢性血吸虫病患者血清中 的循环抗原进行检测，阳性率分别为73.3% （22/30 ）和53.3% （16/30），这两种 方法对 50 例健康人血清进行检测的阳性率均为 0 （0/50 ）。 结论：利用rSj14-3-3 抗原间接ELISA法对急、慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体进行检测，具有 高度的特异性和敏感性。利用基因工程技术可以规模化的生产rSj14-3-3 抗原， 且易于抗原的标准化，体现出广泛应用于血吸虫病免疫诊断和流行病学现场调查 的巨大潜能；双抗夹心ELISA法对循环抗原的检测敏感性欠佳，但对急性血吸虫 病患者仍有一定的诊断价值。该检测方法对血吸虫病患者体内循环抗原的检测有 待进一步研究。 I 利用日本血吸虫重组信号蛋白 14-3-3 检测血吸虫抗原及抗体的研究 关键词： 日本血吸虫；rSj14-3-3 蛋白；单克隆抗体；血吸虫病；ELISA II ABSTRACT Abstract Objective: To prepare recombinant Schistosoma japonicum (Chinese strain) signaling protein 14-3-3 and the antibodies against rSj14-3-3 (monoclonal antibodies and polyclonal antibodies). To evaluate the diagnostic value of rSj14-3-3 and its antibodies (m