利用根霉和酿酒酵母转化生玉米粉为高浓度酒精研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 利用根霉和酿酒酵母转化生玉米粉为高浓度酒精 王丽森，葛向阳，张伟国 (江南大学生物工程学院．无锡214036) 摘要：利用从自然界中新分离得到的生淀粉酶产生菌一根零W-08，并首次采用固态和液 态相结合的培养方法，使生淀粉糖化酶活量达到72IU／mL，然后以生玉米粉为底物，利用根 酶W-09和酿酒酵母Z-06采用同步糖化与发酵工艺，30℃，48h，发酵醪酒精浓度达到21％ (v／v)，转化率为理论转化率的94．5％． 关键词：酒精I糖化酶，，生玉米粉，根零，酸酒酵母 能源问题已经是制约我国乃至世界经济发展的最严重的问题之一，由于不可再生资 源的日趋枯竭，石油日显紧缺，价格不断攀涨，各国科学家开始把目光投向可再生资源的 研究和开发，其中淀粉质原料是首选的可再生资源，被广泛应用于生产燃料酒精。由于 淀粉颗粒被淀粉分子内部的共价键和分子问的氢键结合成非常致密的晶体结构，所以不 溶于冷水而且常温下抗拒来自化学和酶的水解作用。燃料酒精的传统生产方法普遍采 用蒸煮、液化、糖化、发酵和蒸馏的生产工艺，前三道用于淀粉水解的工序能耗约占总能 耗的50％以上[1]。所以降低前期工艺的能耗对降低酒精生产成本是至关重要的。正是 基于以上的诸多考虑，生淀粉酶，在无须高温处理而直接水解生淀粉的真菌发酵产物，引 起了国内外研究工作者的广泛兴趣。 为了生产高浓度酒精，20世纪80年代以来国外相继有报道采用同步糖化与发酵的 工艺将生料直接转化为酒精，但发酵周期长达5d，同时也发现真菌的菌丝体中富含有脂 蛋白，该物质可以大幅度地提高酵母的发酵强度和耐酒精能力[2]．本研究使用新筛选出 一株生淀粉酶产生菌，在固液相结合的培养条件下使其高产生淀粉酶，然后采用同步糖 化与发酵工艺，在较短的时间生产高浓度酒精。 1 材料与方法 1．1菌种 sp．W-08)选自发霉的玉米棒上，并经过紫外、EMS等方法进 根霉W-08(Rhizopus 行诱变，经反复筛选得到的1株高产生淀粉酶根霉。该株菌采用马铃薯培养基[3330C培 养3d‘，4℃保藏，每月转接1次。该菌株鉴定参照《真菌的形态与鉴定》进行“】。酒精酵母 精能力。该菌株在麦芽汁琼脂培养基[3】斜面上培养，4C保藏。 1．2原料 各化学试剂均为化学纯，玉米粉、豆饼粉和麸皮为市购。 王丽森等：利用根霉和酿酒酵母转化生玉米粉为高浓度酒精 493 1．3培养基 1．3．1酵母种子培养基 rain。 酵母膏10 g／L，葡萄糖20g／L，自然pH，0．1MPa灭菌15 g／L，蛋白胨20 1．3．2生淀粉酶产酶固体培养基 麸皮89，豆饼粉29，玉米淀粉69，吐温一800．19，蒸馏水15mL。 1．4方法 1．4．1酶活的测定 生淀粉酶酶活的测量方法依据Iqbal等人[53的报道进行，以可溶性淀粉作为底物，取 2％的可溶性淀粉(o．2mol／L，pH4．5的醋酸缓冲液配制)，50℃ lmL稀释酶液加入4mL 反应30min，以每分钟转化底物为lpmol还原糖所需的酶量为一个酶活单位。 1．4．2根霉产酶实验 的醋酸缓冲液稀释，5，000r／min离心5min，取上清液进行酶活的测定。 1．4．3酵母种子的制备 ， (140r／min)培养30h。在4℃5，000r／min离心发酵液5rain，收集酵母细胞。 1．4．4发酵实验 以蔗糖作为底物来确定根霉菌丝体对酒精酵母耐酒精能力的影响。将成熟的酵母 种子培养基离心，再把细胞重新均匀地分散于调整到150mL、30℃摇瓶培养4d的根霉 0．45 0．15 W-08培养液中，补加蔗糖309，(NH。)2SQg，KH2POtg，调pH