利用海因酶转化5苄基海因制备DN氨甲酰苯丙氨酸的实验研讨.pdfVIP

利用海因酶转化5一节基海因制备 D一N一氨甲酞苯丙氨酸的实验研究 林涛 韦萍 屠春燕 姚忠 欧阳平凯 (南京工业大学制药与生命科学学院南京 210009 摘要 D-N-氮甲跳氛基酸是阵法制备具有光学活性的D一孰基胜的重要中间产物。本丈利用自行 筛选的P-domonassp.j。一01菌发醉产膝，得到具有高海因阵活性的菌体，以游离细她进行了催化DL 一千基海因的水解制备D-N-氛甲耽苯丙氛政的反应。文中通过未取不同旋光性的底物进行特化的 方法。讨论了海因膝的底物光学选择性，并提出了底物消旋速率慢是限制混旋底物转化速率提高的重 要因素;就通度对海因转化过程的影响进行了实脸探讨，研究表明，随若a度的捉高，混旋底物的初 始转化速率 (6小时以内)明显提高，但海因膝的林定性显著降低。 关扭词 D一N一氛甲耽笨丙反故 5一节盖涤因 海因胜 D_或盆动 1 引盲 具有光学活性的D一氨基酸的用途十分广泛，是合成、半合成抗生素、激素、活性多肤等诸 多生物产品的重要原料c，一’t，而5一单取代海因是合成D一氨基酸重要的前体物质。海因酶类似 于二氢啥咤酶，可催化海因开环，生成相应的N一氨甲酞氨基酸，是酶法制备D一氨基酸的关键 酶困。研究表明，海因酶通常具有不同的底物光学选择性，根据其底物光学选择性不同可分为D 一海因酶和L一海因酶，D一海因酶可催化D-5一单取代海因的水解开环，而不能催化L-5一单 取代海因的水解反应，而L一海因酶的作用正好相反M.];海因开环生成的N一氨甲酞氨基酸在 氨甲酸水解酶的作用下，脱除酞胺键，生成相应的D一氨基酸 (图1.)i91。因此，在利用海因酶 催化混旋5一单取代海因水解，制备D-N一氨甲酞氨基酸的过程中转化效率的高低，将主要取 决于所用海因醉的底物光学选择性、海因酶的酶活高低以及L一海因的消旋速率。 L-hydantoin NH3 D-a-ammoacid 圈1阵法制备D一且甚脸的工艺路雌 R91- Enzymaticmaversiono[hydantoinsnItoD一.一.ninoadds 本文采用Pseudomonassp.js一01发醉产海因酶，利用游离细胞转化5一节基海因，制备D- N一氨甲酸苯丙氨酸，对其中涉及的发酵产酶过程、海因酶的底物光学选择性、海因酶的热稳定 性、海因酶促开环反应的动力学过程展开研究，以期为丰富对于酶法制备光学活性D一氨基酸工 322 艺过程的理解，提供理论及实验依据。 2 材料与方法 2.1 试验材科 2.1.15一取代海因衍生物的制备 DL一5一带基海因 (DL一BH),D一节基海因 (D一BH),L一节基海因 (L一BH)采用Henze 一Spee:法，由相应的苯丙氨酸制得 (图2) R 0 丝 R-CH-COON +KCNO+氏0 R- CH- COON HNNH+H,0 sC七 NH, NH-牙-NH2 丫 O 圈2 5一取代海因的制备 Fig2.Diagramofsynthesisof5一substitutedhydantoinswithHenze一SpeerMethod 2.1.2 酶源的获取 由Pseudomonassp.js一01发酵得到，发酵条件为:Pseudomonassp.j。一01菌种子液于 32.51,pH7.5发酵18h;发酵培养基包括:2%葡萄糖，0.