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发酵工程学科的进展
——第四农全国发酵工程学术讨论套论文集
利用响应面法优化Torulopsisglabrata合成
a-酮戊二酸中的辅因子
孙丽平，刘立明，堵国成，陈坚
(江南大学教育部工业生物技术重点实验室，元蠕214035)
摘要：采用响应面分析法对促进光滑球拟酵母(Totulopsisglabrata)CCTCCM202019过
量合成旷嗣戊二酸(a-KG)的关犍园素进行全面分析和优化．垒因子实验表明，硫胺素(B。)
和CaCOs是影响a-KG过量积是的关键因素．在此基础上，采用景陡爬坡路径逼近最大响
84
应区域，印在B，0．016mg／L-CaCqg／L附近．最后用中心组合设计及响应面分析确定
8Z
主要影响目子的最佳浓度为硫胺素(B1)o．02mg／L’生曲素(Bio)0．05mg／L、CaC03g／L
和己破蚋4g／L。采用连一最优组合，a-KG浓度提高到26．8g／L。比优化前增加了34％。
关键词：光滑球拟酵母；r嗣虎=豉}响应面方法
a一酮戊二酸(n—ketoglutarie
重要中间产物，广泛参与生物体内氨基酸、维生素合成以及能量代谢。同时，a—KG作为
营养强化荆，可降低术后患者和长期病人的机体损耗。因此广泛应用于医药、有机合成、
功能性食品等领域。
已发现能过量合成a-KG的酵母主要集中于解脂假丝酵母。一司(Candidalipolyti—
ca)和解脂亚洛酵母(Yarrowia
过量合成4-KG的能力．随后，SofronovaMIu口。3等在利用解脂假丝酵母发酵十六烷烃
生产a—KG中。发现过量积累a—KG的原因在于硫胺素(B。)的不足，导致a一酮戊二酸脱氢
索营养缺陷型高产茵YarrowialipolytieaN1，在此基础上研究了B1的浓度、氮源浓度、
ha
溶氧以及pH值等营养与环境条件对口一KG积累的影响，通过后期朴加氮源，发酵144
—KG产量为49
g／L，rKG对乙醇产率系数0．42。
和乙酸钠的浓度对(丁．glabrata)CCTCC
件下(o．04 B1、0．05mg／LBio、60g／LCaC03和6g／L乙酸钠)，n—KG产量为30．
mg／L
0g／L(7
平对a—KG的影响，对不同因素在不同水平的交互影响欠缺研究。本文在单因素实验的
Surhce
基础上，采用响应面分析法(Response
累a-KG的关键因素及其交互作用，为进一步研究如何调控代谢流实现a—KG过量积累
奠定基础。
第四次全国发酵工程学术讨论台
1材料与方法
1．1菌种
光滑球拟酵母(T．glabrata)CCTCC
(B。)、吡哆醇(Pdx)等四种维生素营养缺陷型，且丙酮酸脱羧酶活性组成型降低，为本研
究室选育菌株口】。
1．2培养基
1
1．2．1斜面和种子培养基(L)葡萄糖30g；蛋白胨10g；KH。P04g；MgSO,·7H20
1g；琼脂30g(斜面添加)；pH5．0。
1．2．2发酵培养基(L)
0．8
葡萄糖100g；氯化铵7g；K地PO‘5g；MgSO‘·7H20g}烟酸8mg；盐酸吡哆
醇0．4mg；pH5．0。硫胺素、生物素、CaCO。和乙酸钠视实验设计而定。
1．3摇瓶培养方法[‘1
ml／500 r／rain
从新鲜斜面上接一环菌人种子培养基(50
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