生物学技术(备课笔记)答案.doc

生物显微镜 第一节生物显微镜的基本结构和主要性能 一、普通生物显微镜的基本结构 （一）光学系统：物镜、目镜和照明装置 1.物镜 物镜是决定显微镜像的质量、分辨率和放大倍数的最关键部位 （1） 一、生物显微标本概述 生物显微标本又叫生物制片，是动物学、植物学、细胞学、组织学、生理学、胚胎学等生物科学及病理解剖学等医学科学研究观察细胞、组织的结构、组成及生理、病理形态变化的一种主要方法。生物制片便于保存，是教学和科研中常用的方法。 至今为止，前人已创造了许多制片方法，分别适用于特定的材料和一定的观察目的。总的来说可以分为两大类： （一）切片法 切片法就是用切片刀或刀片将各种组织切成薄片制成玻片标本的方法，此类方法可分为： 1．徒手切片法 此法多用于植物切片的临时观察。 2．石蜡切片法 用石蜡浸透到组织中，并包埋组织，然后用旋转切片机将蜡块切成薄片，制成切片。这是切片中最常用的一种方法。 3．火棉胶切片法 用火棉胶透入组织中，并用其包埋，然后用滑走切片机切成薄片，制成切片。主要用于大块组织切片。 4．冰冻切片法 利用冷冻装置，使组织块内部及其周围的水分结冰，使组织变硬，然后用切片机切成薄片，制成切片。此法制作步骤少、用时短，不经脱水和透明，故对脂类无影响。组织化学多用此法。 （二）非切片法 非切片法就是将小型动植物或较大动植物的一部分或其组织，不用刀切成薄片而制成玻片标本的方法。非切片法使组织的各个部分不被切断，而保持其原有的形态，但缺点是在标本被挤压时，会使某些结构的正常位置关系有所变动、此类方法包括： 1．整体装片法 对于小的动植物体或较大动植物体的某一部分，不经切片而直接制成玻片标本的方法。如昆虫的口器、水螅、藻类等。 2．涂片法 对于液体或半流动性的材料，不能切片，而直接将材料在载玻片上涂成一块匀薄层，再经固定染色制成标本的方法叫涂片法。如血液、精液和细菌多采用此法制片。 3．压片法 将一些柔软的材料置于玻片上，盖上盖玻片这后，用一定的压力将标本压腑或压开，制成玻片标本的方法。 4．磨片法 主要用于含有钙盐等矿物质，成分坚硬的材料，如脊椎动物的牙齿、骨、软体动物的贝壳、珊瑚虫的骨骼及化石等，用磨石磨成薄片，再封固成玻片标本。 5．伸展法（平铺法） 一些成膜状结构的标本，使它展平放在载玻片上，经固定、染色后制成玻片标本的方法。如肠系膜等多用此法。 6．分离法 为了观察研究组织或器官里的单个细胞或纤维的形状，必须设法使细胞与细胞间质分离，细胞便各自分离开来，再经染色制成玻片标本的方法叫分离法。一般分为化学分离法和撕碎法两种。 二、生物制片的基本步骤 在生物制片中，无论是切片法还是非切片法，一般都必须经过以下几个步骤： 取材→固定→冲洗→染色→脱水→透明→封片。 （一）取材原则 取材是根据我们观察和研究的需要采取材料。是制片的第一步。 1．植物材料的取材 植物材料的采集要注意季节，有些材料若错过季节就要耽误一年时间。 植物材料切割时所用的切割面一般分为二类： （1）横切面 是用刀横越根、茎的横断面的切面；横切片可观察材料自外向内的各种组织。 （2）纵切面 刀的切向与根、茎的长轴方向平行的切面；这种切面又分为两种； ①半径切面 以刀穿过中心点与其半径吻合的切面。由此切得的切片，可以观察到茎中各种组织纵走的情形及髓的排列、厚度等。 ②切线切面 以刀沿植物体的表面与其半径成直角所切的切面。 2．动物的杀死和动物组织的取材 动物的杀死有不同的方法，可根据需要选择。常用方法有： （1）麻醉法 用药熏杀或注射。不同的动物选用不同的麻醉剂。 （2）空气栓塞法 如兔可用注射器将空气从耳缘静脉推入，使之很快死亡。 （3）击头法 用木棒或其他重物，猛击动物头的后部，最好一击而死。 （4）断头法 一些较小的动物，如小白鼠、蛙等，可用剪刀剪断其头部致死。 （5）股动脉放血法 先让动物吸入乙醚或氯仿，麻醉后立即切开股动脉，放血致死。 总之，无论采取哪种方法，都应避免由于痛苦引起挣扎，而造成组织结构发生变化；同时取样必须迅速，越快越好。因为动物一旦死亡，细胞便开始自溶。 （二）固定和固定剂 固定是制片极为关键的一步，制片质量优劣，除与材料的新鲜程度有关外，还取决于固定是否适当和完全。 1．固定的概念和目的 所谓“固定”，就是将所要观察的新鲜组织割取后立即投入某种固定剂中，通过化学药品的作用保存组织、细胞的形态结构，不使其改变形态和变质的一种措施。 固定的作用和目的有：①可以防止组织自溶和腐败，保存细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分。②可使细胞成分沉淀和凝固，因而产生不同折射率，造成光学上差异，使得原来看不清楚的一些结构变得清晰起来，而且有些固