10.电泳法和高效毛细管电泳法PPT.ppt

第10章 电泳法和高效毛细管电泳法 (Electrophoresis and High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 毛细管电泳是带电粒子在电场力的驱动下，在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速分离的电泳新技术，也称为高效毛细管电泳。 20世纪30－40年代 蒂塞利乌斯 (A.W.K.Tiselius）建立了移动界面电泳，将电泳发展成分离技术 获得1948年诺贝尔化学奖 1981,J.W.Jorgenson,K.D.Lukacs实验上和理论上为毛细管电泳的发展奠定了基础。 10.1.2 毛细管电泳的原理 1 装置 毛细管 数据处理 电极 检测器 电极 试样 缓冲液 缓冲液 高压电源 （可高至30KV） 第10章电泳法和高效毛细管电 10.1.3 分离模式 1 毛细管区带电泳 2 胶束电动毛细管色谱 3 毛细管凝胶电泳 4 亲和毛细管电泳 5 毛细管电色谱 6 毛细管等电聚焦电泳 7 毛细管等速电泳 胶束电动色谱的应用特点: 使毛细管电泳不仅能分离离子化合物，而且还能分离中性化合物. 比高效液相色谱更为高效. HPLC 分离柱效为5000－25000理论板数/m MECC 可达到50000－500000理论板数/m 比高效液相色谱更为高速.MECC分离时间通常小于30min，但达到相仿效率的毛细管LC，需要更长的时间。 第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式 第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式3 毛细管凝胶电泳 CGE 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构，按分子的大小分离 毛细管凝胶电泳的特点： 综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 ， 电泳峰尖锐，柱效极高 短柱上实现极好的分离 试样容量为10－12g 主要缺点:制备柱较困难，寿命较短 已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式 第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式5 毛细管电色谱 CEC:以电渗流驱动流动相， 开管和填充两种，通常填充或涂布固定相 比高效液相色谱具有更高的柱效 第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式6 毛细管等电聚焦 CIEF: 建立在不同蛋白质或多肽之间等电点（pI值）差异基础上的分离方法，通过建立pH值梯度。 蛋白质的等电点(pI): 指蛋白质分子的表观电荷数为零时的pH值。 进样－等电聚焦－检测 先将脱盐的试样（蛋白质）以≥1％的浓度与两性电解质溶液混合，用压力进样