腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后SDF-1的影响.docVIP

精品论文 参考文献 腺苷预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后SDF-1的影响 李杨 　　（河南新乡卫生学校 453000） 　　【摘要】 目的：探讨腺苷对脑缺血再灌注损伤后神经干细胞的作用，分析腺苷预处理对脑缺血再灌注后间质细胞衍生因子-1（SDF-1）表达的变化，显示腺苷对神经干细胞的影响。方法：健康SD大鼠96只，随机分为4组：假手术组（F组）、腺苷预处理后假手术组（AF组）、缺血再灌注组（IR组）、腺苷预处理组（AP组）。用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO）。术后进行神经功能缺失评分，利用免疫组织化学技术检测SDF-1的表达情况。结果：（1）神经功能评分：IR组各亚组和AP组各亚组与F组、AF组各亚组相比差异显著（Plt;0.01）, AP组各亚组与IR组各亚组相比差异显著（Plt;0.05）。（2）免疫组织化学法检测SDF-1的表达： F组和AF组脑皮质中有微量SDF-1表达，IR组和AP组各???组SDF-1表达明显增多，于7d达到高峰，且AP组SDF-1的表达显著多于IR组。结论：（1）腺苷预处理能减轻大鼠缺血性脑损伤所引起的神经功能缺损症状。（2）腺苷预处理能增强大鼠脑缺血再灌注后中枢神经内SDF-1的分泌。 　　【关键词】 腺苷；缺血再灌注；SDF-1 　　【中图分类号】R651 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）24-0068-02 　　研究报道，脑血管病目前已成为我国第一位致残和死亡原因，并且有逐年增多的趋势，其中缺血性脑血管病占脑血管病的80%～85%[1]。脑缺血治疗的关键在于挽救缺血半暗带濒临死亡的神经元和促进损失后神经功能恢复[2]，现经临床证实最有效的方法是在超早期内（＜3h）使用重组组织型纤溶酶原激活物恢复缺血区血液供应，但是病人往往由于各种原因错过超早期，神经元的死亡在所难免。本课题用腺苷预处理后建立大鼠MCAO模型，以此来分析腺苷对脑缺血再灌注损伤后SDF-1的影响，从而进一步揭示腺苷对神经系统的保护机制。 　　1.材料与方法 　　1.1 材料 　　（1）实验动物：健康SD大鼠96只，均为雄性。（2）主要实验材料和试剂：兔抗大鼠SDF-1多克隆抗体、腺苷、PV-6001免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒、OLYMPUS BH2照相显微镜。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1实验分组 　　1.2.1.1动物分组 　　健康雄性SD大鼠96只，随机分为F组、AF组、IR组、AP组，每组各24只。根据再灌注时间随机又分为3d、7d、14d、21d四个亚组，每个亚组各6只大鼠。 　　1.2.1.2给药方法 　　F组、AF组和IR组大鼠于手术前3天开始腹腔注射生理盐水，每天1次，每次2ml；AP组大鼠于手术前3天开始腹腔注射腺苷注射液，剂量为1.5mg/kg体重，生理盐水稀释到2ml，每天1次；共计3天。 　　1.2.2大鼠MCAO模型建立 　　本实验采用线栓法制备大鼠MCAO模型，参照Zea longa[3] 等的制作方法。 　　1.2.3神经功能缺失评分 　　MCAO后，分别在3、7、14、21d，根据Longa等人描述的5级神经缺陷评分法进行神经功能评分。 　　1.2.4标本采集与处理 　　按照预先设定的时间（3d、7d、14d、21d）取出大脑后制成冰冻切片，免疫组织化学法染色，整个过程中用PBS代替一抗做阴性对照。SDF-1阳性细胞为胞浆被染成棕黄色的细胞；每张切片在高倍镜下（200times;）随机观察缺血侧额顶叶和纹状体内外侧不重叠的5个视野，计算阳性细胞数，取平均值，为该切片SDF-1阳性细胞数。 　　1.3 统计学处理 　　应用SPSS12.0统计软件分析，实验数据以均数plusmn;标准差(x-plusmn;s)表示，多组间均数的比较采用t检验, 两两比较采用最小显著法（LSD）检验。以alpha;=0.05为检验标准，Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2.结果 　　2.1 神经功能缺失评分 　　表1 各组不同再灌注时间点大鼠神经功能缺失评分（x-plusmn;s，n=6） 　　3．讨论 　　大量研究资料证明，腺苷及其受体对多种脏器缺血再灌注所造成的损伤有重要的保护作用[4-5]。实验结果显示腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经功能缺损有明显的减轻作用。SDF-1对神经干细胞的再生、迁移和分化有重要作用。有研究发现，脑损伤后SDF-1ɑ mRNA表达和SDF-1ɑ蛋白合成没有增加，但1～3d后在脑皮层弥散分布，且CXCR4 mRNA以及蛋白合成的增加有显著性差异，同时Nestin阳性细胞的分布也增加，说明SDF-1/ CXCR4系统能够促