生物化学第1章蛋白质.ppt

* * * * * * * * * 1、沉淀 ⑴概念 ⑵关键：水化膜的破坏，电荷的消失 ⑶方法 五、蛋白质的沉淀 a、盐析（salting out） 盐溶：蛋白质在低浓度盐中溶解度增加的现象。 盐析：蛋白质在高浓度盐中溶解度降低析出的现象。 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 提问：原因？ 盐溶—盐析 分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，加入少量盐离子后破坏了这种吸引力，使分子分散，溶于水中 盐溶 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 提问：原因？ 蛋白质分子表面的亲水区域，聚集了许多水分子，盐浓度高时，这些水分子被盐抽出，暴露出的疏水区域相互结合，沉淀。 盐析（（NH4）2SO4 b、有机溶剂沉淀法 ● 原理 c、重金属沉淀法 ● 原理 d、生物碱试剂 六、蛋白质的颜色反应 自学 第6节 蛋白质的研究方法 一、蛋白质含量的测定 1、凯氏定氮法 2、紫外吸收法 3、…….. 蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide)链以特殊方式结合而成的生物大分子。 蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在6000道尔顿以上的多肽称为蛋白质。 蛋白质分子量变化范围很大, 从大约6000到1000000道尔顿甚至更大。 二、蛋白质的相对分子质量 1道尔顿＝1×C12绝对质量/12 ≈1.66×10-27千克 测定蛋白质分子量的常用方法 1、沉降速度法 一种蛋白质分子在单位离心场的沉降速度 为恒定值，称为：沉降常数/系数（S） 瑞典的蛋白质化学家T.Svedberg 1S=10-13秒 2、凝胶过滤法 3、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 蛋白质颗粒电泳时迁移率取决于： 所带电荷 分子量 分子形状 十二烷基磺酸钠 原态蛋白质 变性 ？ 磺酸基 极性亲水 烷基 亲油（蛋白质疏水区） 迁移率与电荷和形状无关，仅取决于相对分子质量 巯基乙醇破坏二硫键 第6节 蛋白质的分类 1、 依据蛋白质的外形分类 球状蛋白质：globular protein 纤维状蛋白质：fibrous protein 膜蛋白质：membrane protein 2、依据蛋白质的组成分类 简单蛋白(simple protein) 结合蛋白(conjugated protein) 。 简单蛋白质 又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由?-氨基酸组成的肽链，不含其它成分。 1、清蛋白和球蛋白：albumin and globulin 2、谷蛋白(glutelin)和醇溶蛋白(prolamin) 3、精蛋白和组蛋白 4、硬蛋白 结合蛋白质 由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成， 色蛋白：如血红蛋白，叶绿蛋白和细胞色素等。 糖蛋白：如细胞膜中的糖蛋白等。 脂蛋白：如血清?-，?-脂蛋白等。 核蛋白：如细胞核中的核糖核蛋白等。 磷蛋白：如胃蛋白酶等。 金属蛋白：如铁硫蛋白，固氮酶等。 第7节 蛋白质的分离纯化及应用 一、蛋白质分离纯化的一般原则 层析法 电泳法 超离心法 透析和超滤 盐析（硫酸铵盐析） 等点电沉淀 有机溶剂沉淀 离心 │←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│ 材料选择与处理 细胞破碎 有效成分的抽提 浓缩 生物组织→ →提取液→ →粗产品→ →干燥与保存 分子大小 溶解度 电荷性质 吸附性质 生物亲和力 依据原理 二、蛋白质的应用 本章小节 1. 蛋白质的生物学作用 2. 蛋白质的组成（元素组成、化学组成）及蛋白质含量的测定 3. 20种氨基酸的结构、分类、名称、三字缩写符 4. aa的重要理化性质：两性解离、等电点等 5. 蛋白质的一级结构：肽、肽键、活性多肽 6. 蛋白质的空间结构：二级结构单元（ ?-螺旋、?-折叠、 ?-转角）、三级与四级结构（超二级结构、结构域、亚基）及结构与功能的关系 7. 蛋白质的性质：大分子性质、两性解离（等电点、电泳）、胶体性质、蛋白质沉淀、蛋白质变性、紫外吸收及颜色反应 8. 蛋白质的分类：按外形及组成分类 选择题 1. 在下列有关谷胱甘肽的叙述中,正确的是( c ) A. 谷胱甘肽中含有胱氨酸 B. 谷胱甘肽是体内重要的氧化剂 C. 谷胱甘肽谷氨酸的α-羧基是游离的 D. 谷胱甘肽的C-端是主要的功能基团 2. 在有关蛋白质三级结构的描述中, 错误的是( a ) A. 具有三级结构的多肽链都有生物学活性 B. 三级结构是单体蛋白质或亚基的空间结构 C. 三级结构的稳定性由次级键维持 D.